杨树锈病病原菌的分子鉴定及防治措施
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【摘要】青杨铸病是互助县杨树人工林和天然林的重大病害之一，在纯林或落叶松混交林中均普遍发生并造成严重的经济损失，该研究对互助县南门峡林场杨树锈病病原菌进行了分子鉴定，为明确其正真的病原菌种类并总结了防治措施。
【关键词】杨树 锈病 分子鉴定 防治技术
1 病害调查
2015-2017年，在互助县南门峡林场选取10块标准地，7～10月每隔1月调查一次青杨锈病发病率与病情指数。标准地的设置为每块标准地面积约为30×30m2，每块标准地内随机选4～5行青杨，各行再每隔3株选取1株，随机摘取上、中、下三个部位青杨叶片，总调查30～50株，叶片总数不少于800片；对于散生的青杨，依据实际分布情况随机选取调查株。青杨锈病病害严重度分级参照曹支敏等的分级标准，见表1。
经调查发现，青杨锈病主要危害青杨苗木和新生叶片，导致未成熟芽早落，该病害于5-6月在叶背出现退绿斑点并产生夏孢子堆，并产生桔黄色小泡，破皮后散出黄粉堆，严重时黄粉布满整个叶背，9月，叶正面出现锈红色斑点，并逐渐变成棕色至褐色的冬孢子堆，叶子提前脱落，树木长势变弱易受其它病原物侵染。
2 病原菌分子鉴定
2.1 夏孢子DNA提取
取夏孢子DNA，用灭菌载玻片刮取新鲜夏孢子堆于灭菌研钵中研磨，置于1.5mL离心管内，具体加样步骤如下：①加20μl的Lysozyme溶液，混合，室温静置6min；②加30μl的EDTA Buffer，混合，室温静置5min；③加200μl的Solution A，振荡，65℃保温10min；④加400μl的Solution B，剧烈振荡15S；⑤加650μl的So-lution C，混合；12，000rpm離心1min，弃上层，将无色下层移人预先置于1.5ml离心管上的Filter Cup中，12，000rpm离心1min。⑥弃Filter Cup，在滤液中加入450μl的DB Buffer，混合均匀。将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。⑦将上述操作的混合液转移至Spin Column中，12，000rpm离心1min，弃滤液。⑧将500μl的Rinse A加入至Spin Column中，12，000rpm离心1min，弃滤液。将700μl的Rinse B加入至Spin Column中，12，000rpm离心1min，弃滤液。⑨将Spin Column安置于CollectionTube上，12，000rpm离心1min。⑩将Spin Column安置于新的1.5ml的...
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