利用人工ta-siRNA策略培育抗PVY烟草
摘要：人工ta-siRNA基因沉默技术具有同时表达多个ta-siRNA和产生ta-siRNA位置固定等特点，在精确性和高效性等方面有明显优势。本研究以马铃薯Y病毒（potato virus Y，PVY）外壳蛋白（coat protein，CP）为靶基因，选取不同位置的3个siRNA为靶序列，烟草TAS3a作为ta-siRNA表达的骨架，分别构建植物表达载体PVY-CP5′、PVY-CPM和PVY-CP3′，并利用叶盘法转化烟草NC89。瞬时表达检测结果显示，3个syn-tasiRNA植物表达载体均能在植物体内成功表达siRNA;抗病性鉴定发现，转PVY-CP5′、PVY-CPM和PVY-CP3′的转基因株系中抗病株系的比率分别为45.08%、27.21%、61.90%;Northern杂交分析显示，目的片段转录产物（总RNA）的积累量与植株的抗病性呈负相关，转基因植株中均有siRNA存在，表明植株的病毒抗性是由RNA介导的。
关键词：人工ta-siRNA;马铃薯Y病毒（PVY）;RNA介导的病毒抗性;转基因烟草
中图分类号：S572.034文献标识号：A文章编号：1001-4942（2018）12-0086-05
RNA沉默是植物调控内源基因表达和防御外源核酸入侵的重要机制，其根本就是产生小RNA整合到RNA沉默复合体中介导靶RNA的降解或抑制其翻译[1]。其中Trans-acting siRNAs作为植物中起反式调控作用的一类siRNA[2]，在植物生长发育过程中具有重要的表达调控功能。目前为止，在拟南芥中共发现4个编码ta-siRNA的TAS基因家族[3]，其中TAS1和TAS2依赖于miR173的剪切作用，TAS3依赖于miR390的剪切作用，TAS4依赖于miR828的剪切作用。研究发现，TAS3基因中同时存在2个miRNA靶位点，对ta-siRNA的正确形成是必需的[4， 5]，同时，TAS3基因中miR390靶位点及两个相连的ta-siRNA产生位点高度保守，目前在番茄、烟草、水...
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