除虫菊茎腐病原菌的分离和鉴定
除虫菊茎腐病造成植株由茎基部开始向上变褐、腐烂，后期发展到花叶，整株枯死。本文采用柯赫氏法则，结合菌落、孢子形态等显微特征及ITS序列比对分析，首次证明除虫菊茎腐病主要由禾生镰孢菌直接侵染引起，尖孢镰孢菌、禾谷镰孢菌、厚垣镰孢菌亦可从伤口侵入致病。
除虫菊是一种古老的天然杀虫菊科植物。它含有高效杀虫而对人畜无害的活性成分，如其中除虫菊素广泛用于生产杀虫剂和蚊香。随着规模化种植面积扩大和连年种植，病害日益突出，如除虫菊茎腐病危害严重，部分田块几近绝产，已成为除虫菊产业发展的瓶颈。初期，植株茎基部褐色至黑色腐烂，后期，部分侧枝甚至整株茎、叶、花全部黑褐色腐烂枯死。由于种植范围不广，除虫菊病害还未得到广泛关注，许多病原尚不清楚。本文从除虫菊茎腐病发病部位分离和鉴定了病原，旨在为制订该病防治策略提供理论依据。
1材料与方法
1.1病原菌分离
除虫菊茎腐病样本来自云南省峨山县双江镇福泉村。病原菌的分离采用常规组织分离法。从病株上剪下病健交界处，冲洗干净，切取1～2mm×1～2mm的组织，用70%酒精消毒30秒，再用0.1%浓度的升汞溶液消毒1～5分钟，然后用无菌水冲洗3次，每次1～2分钟，最后移植于PDA培养基平板上，置于25℃恒温条件下培养。待长出菌丝后，在菌落边缘用无菌接种针挑取菌丝块移至PDA培养基中，继续放入25℃恒温5d，再置于4℃冰箱内贮存备用。
1.2病原菌纯化
使用稀释法纯化病原菌。将初步纯化的病原菌转移至CLA（康乃馨叶片煎汁培养基）和SNA（Spezieller N？hrstof-farmer Agar）培养基上，25℃、12小时光照黑暗交替培养，期间保持病原菌氧气充足，5-15天后，显微镜下观察其产孢情况。挑取已产孢的菌落，加入1-2mL灭菌水后，用灭菌牛角匙刮取孢子于灭菌水中，吸取孢子悬浮液分级稀释，并各吸取1mL均匀涂在加入氯霉素的PDA培养基上，25℃培养48小時。挑取单菌落菌株培养。
1.3致病菌筛选
除虫菊采用漂浮育苗法培养，发芽后移栽至沙土基质中，按照柯赫氏法则，将纯化后的真菌用牙签接种法插入除虫菊幼苗基部，或菌株培养物土壤接菌的方法接菌，将培养4天，长满菌丝的较薄PDA培养基与灭菌基质混匀，以无菌PDA培养基与基质混匀做对照，覆盖除虫菊种子育苗，待幼苗长出后即可观察发病情况。植株发病后，从植株发病部位重新分离病原菌，最终筛选出致病真菌。
1.4菌株形态鉴定
1.4.1菌落形态观察
挑取纯化后的菌...
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