牛腹泻病毒最佳检测方法(PCR法)及影响因素
打开文本图片集
摘 要:PCR技术是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术,该技术通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3个温度循环,能将靶DNA扩增数百万倍,获得极高的检测敏感性。通过PCR技术对新生牛是否带有牛病毒性腹泻病毒的血清样本进行检验。
关键词:BVDV;PCR;引物
中图分类号:Q939.94 文献标识码:A 文章编号:1001-0769(2017)05-0085-03
1 什么是牛病毒性腹泻
牛病毒性腹泻(黏膜病)是由牛病毒性腹泻病毒[1](Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV)(属于黄病毒科瘟病毒属)引起的传染病,各种年龄的牛都易感染、以幼龄牛易感性最高。
牛病毒性腹泻或黏膜病的病原体。属于披膜病毒科、瘟病毒属的成员。病毒粒子呈圆形,有囊膜,直径50 nm~80 nm。RNA核芯直径(24±4) nm,分子量3×106,沉降系数80 S~90 S。
牛病毒性腹泻黏膜病可以穿过胎盘感染,特别是怀孕早期。其病毒血清抗体阴性的母牛一旦感染,常常通过胎盘使胎儿产生免疫抑制,引起持续性病毒血症,如果小牛正常产出,病毒血症能持续地带入成年期,这种牛临床貌似健康,血清中又无保护性抗体,但体内始终带毒,是牛群中最危险的传染源[2]。
本研究是通过PCR技术对新生牛是否带有牛病毒性腹泻病毒进行检验,排除患病牛,制备无病毒血清,进一步用于兽药的研制。
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 主要试剂
氯仿、无水乙醇、75%酒精,DEPC水、ddH2O、RNAiso plus、DNA Marker购自TaKaRa公司;核酸染料购自百泰克有限公司。
2.1.2 器材、仪器准备
1 000 μL移液枪,200 μL移液枪,50 μL移液枪、1 000 μL枪头,200 μL枪头,75%酒精棉,止血钳,EP管,EP管架;PCR扩增仪为美国伯乐公司,型号为S1000等。
2.1.3 样品
共24个样本包括:22个未知样本均为新生牛初血清;阴性对照和阳性对照。
2.2 方法
PCR技术,即聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是由Saiki发明,其技术对世界生物医学的巨大推动作用,获得了1992年的诺贝尔医学奖[3]。由美国PE-Cetus公司的Kary Banks M μLis在1985年建立的[4]。这项技术可在试管内...
== 试读已结束,如需继续阅读敬请充值会员 ==
|
本站文章均为原创投稿,仅供下载参考,付费用户可查看完整且有格式内容!
(费用标准:38元/2月,98元/2年,微信支付秒开通!) |
升级为会员即可查阅全文 。如需要查阅全文,请 免费注册 或 登录会员 |