大菱鲆源杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella,piscicida）的分离鉴定
摘 要：从患腹水病大菱鲆Scophthalmus maximus的肝脏中分离到一株优势细菌G1，经人工感染实验表明G1为引发大菱鲆腹水病的致病菌，且半致死浓度为LD50=1.21×105CFU>g-1。采用常规的生理生化鉴定方法及分子生物学方法对G1进行分析，结果表明，G1的16S rRNA基因序列与杀鱼爱德华氏菌Edwardsiella piscicida的同源性达100%，系统发育分析表明菌株G1与杀鱼爱德华氏菌分支聚为一支，结合生理生化鉴定结果确定G1为杀鱼爱德华氏菌。药敏试验表明菌株G1对头孢曲松、环丙氟哌酸、左氧氟沙星等8种抗菌药物高度敏感。
关键词：大菱鲆Scophthalmus maximus;杀鱼爱德华氏菌Edwardsiella piscicida;鉴定;药敏试验
爱德华氏菌属肠杆菌科，广泛存在于水体环境中，一定条件下可使不同重要经济鱼类致病[1-3]。2012年以前，世界公认的爱德华属有3种，分别为迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）、保科爱德华氏菌（Edwardsiella Hoshinae）、鲶鱼爱德华氏菌（Edwardsiella ictaluri）。Abayneh等人对13株鱼类迟缓爱德华分离株按照表型和遗传表征进行归类划分，其中12株重新定义为杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）[4]。研究发现，杀鱼爱德华氏菌常引起加州鲈（Micropterus salmoides）[5]、白鲑鱼（Whitefish）[6]、尖吻鲈鱼（Lates calcarifer）[7]、斑点叉尾鮰（Channel catfish）[8]等鱼类病害的发生。自2013年杀鱼爱德华氏菌从迟缓爱德华氏菌中分离出来重新归类为爱德华氏菌新种属以来，国内杀鱼爱德华氏菌引起大菱鲆Scophthalmus maximus腹水症暴发的报道较少。
2017年，青岛胶南养殖场大菱鲆腹水症暴发。本实验从患腹水症大菱鲆肝脏中分离出疑似病原菌G1，通过对菌株G1形态、生理生化特征、分子特征的研究确定其分类学地位，同时对其致病力进行初步研究，以期为后续养殖大菱鲆腹水病病原的检测和防治提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 病原菌分离
取具有典型腹水病症状的濒死大菱鲆，无菌条件下，用常规方法取濒死的病鱼的肝脏、肠道，研磨稀释后涂布于2216E培养基，30 ℃培养24 h，肉眼观察菌落形态、大小、颜色等，挑取不同形态的优势菌落，对挑选的优势菌落进行三次以上的纯化培养。纯化培养24 h，将纯培养物保藏至含有30%（V/V）甘油的2216E液体培养基中，于-80 ℃长期保存。
1.2 人工回感实验
健康大菱鲆购自青岛胶南养殖场，体长（13.4±1.0）cm，体重（31.7±1.0）g。挑...
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