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慢性心衰患者血管内皮细胞体外损伤模型的研究

材料写作网    时间: 2020-10-17 04:05:25     阅读:次     手机站


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【摘要】目的 研究慢性心力衰竭患者血管内皮细胞体外损伤模型的建立办法。方法 收集心衰患者及健康人血清并干预人脐静脉内皮细胞,检测细胞活性OD值、循环内皮细胞(CEC)、血管假性血友病因子(vWF)、可溶性血栓调节蛋白(sTM)含量并做统计学分析。结果 心衰组CEC、vWF、sTM含量比正常组高(P<0.05)。结论 慢性心衰患者血清可损伤血管内皮细胞功能。

【关键词】慢性心衰;内皮细胞;模型

【中图分类号】R54 【文献标志码】A

构建科学、客观的实验模型对心衰发病机制及病理过程的研究及临床诊治具重要意义。本研究采用心衰患者的血清作用于体外培养的血管内皮细胞,构建血管内皮细胞损伤模型,并通过各项指标评价模型的科学性、客观性。

实验材料与方法

一般资料:心衰组30例,年龄62~75岁,男19例,女11例。正常组30例,年龄62~78岁,男17例,女13例。两组一般资料无差异(P>0.05)。

试剂与设备:胰蛋白酶、MTT(日本Sigma公司),标酶仪(美国biotek),胎牛血清(四季青研究所)、血管内假血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(sTM)酶联免疫定量检测(EHSA)试剂盒(美国ADL公司)。

方法:

血清制备:空腹采血5ml,静置后离心,取上清液制备成血清,恒温灭活后进行过滤除菌分装,-20℃保存。

致伤模型的建立:将对数生长期的人脐静脉分为2组(A组、B组)种入培养板,每组设30个复孔,用胎牛血清培养24h后,在A组加入15%心衰患者血清+85%DMEM的条件培养基进行损伤造模,在B组加入15%健康人血清+85%DMEM的条件培养基。培养24h后进行指标检测。

实验指标观察:①MTT法检测细胞活性 各组细胞每孔加入MTT,继续培养4h后每孔加入DMSO,自动酶标仪震荡后于490nm处测定吸光值。实验中设不加细胞只加培养液的孔为空白对照孔。比色时以空白对照孔调零。②循环内皮细胞数(CEC)的检测 等密度梯度离心法。将上清稀释后加入到密度Percoll液中离心,取界面以上液体作为上层,Percoll 层液体作为中层。上层液体离心后弃管中上清液,加生理盐水。中层震荡使细胞悬浮备检。上述液体滴于血细胞计数池中,观察内皮细胞数。③vWF和TM水平的检测 上清液离心后分离血清,-80℃冰箱保存...



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