紫花苜蓿的抗菌肽基因Rev4遗传转化
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摘要：抗菌肽是机体先天免疫的重要组成成分，是许多生物体抵抗外来致病菌侵袭的第1道屏障。Indolicidin是一个13氨基酸残基肽，从牛的嗜中性粒细胞的胞浆小颗粒分离而来，具有广谱抗菌性，Rev4是其人工设计的反向序列。利用经典叶盘法，以根癌农杆菌A.GV3850介导紫花苜蓿遗传转化，GUS瞬时表达检测转化体系建立成功；压力筛选后叶片基因组DNA的PCR成功检测到抗菌肽基因条带，PCR产物回收测序得到13株转化紫花苜蓿。
关键词：紫花苜蓿；抗菌肽；遗传转化
中图分类号： Q785文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）07-0044-03
紫花苜蓿（Medicago sativa L.）为四倍体异花授粉的多年生草本植物，属于豆科苜蓿属，基因组大，是很好的水土保持植物与绿肥植物，在世界范围内广泛种植，以'牧草之王“著称[1]。长期以来，人们围绕经济有效地提高紫花苜蓿产量和品质两大目标进行了不懈的努力[2-3]，但由于传统的紫花苜蓿育种方法时间长、成本高且可利用的种质资源有限，基因工程的方法更具有科学性和准确性[4]。
抗菌肽（antimicrobial peptides，AMPs）是生物体天然免疫的重要组成部分，是机体抵御外源致病菌的第1道屏障，由于其独特且多样的生物学功能和作用机制，引起了科学界的广泛关注和研究[5]。抗菌肽是自然进化的产物，它可以干扰病原微生物，使其细胞膜结构发生改变，通透性增加，进而起到杀菌作用，又因病原体不易对其产生抗药性，因此成为新型高效的抗生素替代品[6]。目前，人们一方面研究抗菌肽在先天免疫中发挥作用的机制，一方面设计新型抗菌、抗感染的抗菌肽制剂[7]，抗菌肽研究前景非常广阔。
Indolicidin是一个13残基肽（IL-PWKWPWWPWRR-NH2），从牛的嗜中性粒细胞的胞浆小颗粒分离而来，具有广谱的抗菌和抗病毒活性[8]。针对外源抗菌肽基因转入植物体内容易被消化分解的不足，有人设计了抗菌肽Indolicidin的反向序列Rev4，合成的反向肽仍然有高的抗菌活性，且相比其他的抗菌肽，对植物蛋白酶的稳定性更高[9]。本研究利用经典叶盘法，以根癌农杆菌A.GV3850介导紫花苜蓿遗传转化，GUS瞬时表达检测转化体系建立成功；压力筛选后叶片基因组DNA的PCR成功检测到抗菌肽基因条带，PCR产物回收测序得到1...
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