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家蚕核型多角体病毒BmOrf99的研究

材料写作网    时间: 2020-09-09 04:05:12     阅读:


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摘要[目的] 探讨家蚕核型多角体病毒BmOrf99在杆状病毒生命周期中的功能。[方法] 运用Red同源重组技术构建BmOrf99缺失型重组病毒,研究BmOrf99对病毒复制、BV产生和病毒形态发生的影响。[结果]病毒转染细胞1.5 h可检测到BmOrf99表达;通过Red重组系统构建敲除型病毒BmNPVBmOrf99KOpolhGFP,转染结果显示,敲除BmOrf99病毒仍能增殖复制,透射电镜观察显示,BmOrf99敲除对病毒粒子装配和多角体形成无明显影响。病毒DNA转染后24~72 h,敲除型病毒转染细胞培养上清BV水平略高于对照病毒BmNPVBmOrf99WTpolhGFP;转染后72 h,前者细胞培养上清TCID50略高于后者;转染6~72 h,敲除型病毒转染细胞中病毒DNA水平高于对照病毒转染细胞;敲除型病毒感染72 h后,细胞中BmOrf98a表达水平比对照组提高2.21倍。[结论]BmOrf99为病毒早期基因,且复制非必需,缺失可促进病毒DNA复制,略增加BV水平,但对病毒形态发生无影响,BmOrf99有可能通过调节病毒其他基因的表达而发挥作用。

关键词家蚕核型多角体病毒;BmOrf99;敲除;BV;ODV

中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611(2015)21-043-07

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)属于甲型杆状病毒属,具有囊膜包被的双链环状DNA,是主要寄生于节肢动物的一类病原微生物[1]。BmNPV基因组序列测定由Gomi 等[2]于1999 年完成,其基因组DNA全长128 413 bp,G+C含量占40%,含有136个潜在的开放阅读框(open reading frame,ORF)。BmNPV与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)基因组结构非常接近,比较BmNPV和AcMNPV的核苷酸序列,发现有115个ORFs(占基因组的78%)是高度保守的(同源性超过90%),同源ORFs之间的氨基酸序列同源性达93%[3]。在杆状病毒感染复制周期中,能够形成2种不同类型的病毒粒子,一种是独特的非包涵体形态,核衣壳在细胞核内形成后,通过细胞质膜出芽时获得囊膜,并释放到细胞间质中,即出芽型病毒粒子(budded virus,BV),另外一种在细胞核内获得囊膜的病毒最后被包埋在由多角体蛋白质组成的包涵体内,被称为包埋型病毒粒子(occlusion derived virus,ODV...

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