间接酶联免疫吸附法测定大鲵凝集素
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摘要 [目的]建立基于大鲵凝集素多克隆抗体酶联免疫定量分析的方法。[方法]以大鲵凝集素为抗原，免疫新西兰白兔获得多克隆抗体，建立间接非竞争酶联免疫检测方法，并对该方法的精密度及准确度进行了测试。[结果]获得的抗血清效价为1∶16 000，多克隆抗体血清的最佳稀释度为1∶3 000，辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔二抗最佳稀释度为1∶30 000，抗原浓度在31.25～1 000.00 ng/mL范围内呈良好的线性关系，相关系数R2>0.99，板内及板间变异系数范围分别为2.50%～9.88%和2.69%～11.59%，回收率为91.5%～109.5%。分布结果显示，大鲵凝集素在躯干部肌肉组织中的含量较高。[结论]成功建立了大鲵凝集素间接非竞争酶联免疫检测方法，该方法灵敏度高，重复性好，可用于实际检测大鲵肌肉组织中的凝集素含量。
关键词 大鲵；凝集素；酶联免疫；多克隆抗体
中图分类号 S966.6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2016）33-0074-03
An Indirect Non-competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Determination of Andrias davidianus Lectin
WANG Xiao-long，TONG Chang-qing，LI Wei*（College of Food Science and Engineering，Dalian Ocean University，Dalian，Liaoning 116023）
Abstract [Objective] To prepare polyclonal antibody against the content of lectin in skin mucous of Andrias davidianus and develop an indirect non-competitive enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.[Method] Andrias davidianus lectin was used as complete antigen.The New Zealand white rabbits were immunized according to the immunization procedure.Finally through the optimization of coating amount of lectin and antibody dilution，an indirect non-competitive enzyme-linked immunosorbent assay was developed.[Result] The titer of the antiserum determined by ELISA was up to 1∶16 000.Determined polyclonal antibody diluted was 1∶3 000.The best working...
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