海洋微藻的玻璃化冻存技术研究进展
摘要：微藻的营养丰富，在生活和生产实践中备受研究者的亲睐，但由于海洋微藻的长时间培养和多次接种易导致藻种污染或遗传漂变，使微藻的科研工作和商业化开发受到极大的限制。因此有效的藻种保存方法是进一步研究和开发利用海洋微藻的关键。玻璃化保存技术是一门新兴的生物技术，具有操作简便、快速、高效等特点，是目前海洋微藻种质资源长期稳定保存的理想方法。现对玻璃化法超低温保存的原理、优点，玻璃化冻存法的操作程序、影响因素、关键技术和海洋微藻冻存苗的应用前景进行综述，并对其今后的发展进行了展望。
关键词：海洋微藻；玻璃化冻存；研究进展
中图分类号：S917.3文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）01-0190-05
收稿日期：2013-05-24
基金项目：国家自然科学基金（编号：30960215）；广西自然科学基金（编号：桂科青0728019）。
作者简介：林小园（1989”），女，硕士研究生，主要从事海洋微藻的种质保存及多不饱和脂肪酸研究。E-mail：lxyqzw@126.com。
通信作者：刘红全，副教授。E-mail：lhongquan@163.com。近年来，随着陆地资源的衰竭，丰富的海洋微藻资源成了人们研究的热点。海洋微藻含有高价值的营养成分及药物活性成分，如蛋白质、色素、脂肪类、维生素等生物活性物质[1-3]，是具有巨大应用价值的潜在资源；但由于藻种保存技术的限制，已成为海洋微藻资源商业化培养开发的瓶颈。分离纯化得到1个单藻种，往往需花费数月时间甚至更长，尤其筛选出1个优良的、有应用价值的微藻藻种就更加困难，因此成功的保种方法是微藻培养和进一步开发应用的基础和关键环节。
目前海洋微藻在科研和实践生产中常采用的保种方法有继代培养法、固定化保存、超低温保存法。这些方法在实际应用中存在诸多弊端，如继代培养在长时间培养、多次接种下，易导致藻种污染或者遗传漂变，生命力减退等失去良种的价值。固定化培养程序较复杂，需要细心操作，而且大多数微藻在培养后期常会从胶珠中溢出，有的胶珠还会融解，导致保种失败。虽然大量试验结果表明，超低温冻存法将存活率提高到30%以上，但同样存在一些缺陷，需要复杂的预冷冻程序，费用较高，耗时长且不可避免冻融过程中晶体的形成，对保存材料造成损伤。因此研究者在超低温贮存技术基础上进行了新的探索，发展起来包埋-脱水法和玻璃化法2种新的冷冻保存技术。包埋-脱水法操作简单，但存活率较低，仅为15%[4]，而玻璃化冻存法...
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