共同性斜视眼外肌肌酶组织化学研究
共同性斜视发病率高,危害性大,不仅有碍于外观,给患者心理上造成严重创伤,而且严重影响双眼视觉的形成和发育。本研究分别采用免疫组织化学染色和肌球蛋白三磷酸腺苷酶(mATPase)组织化学染色的方法对共同性斜视患者弱侧眼外肌和正常人眼外肌的收缩蛋白和快慢纤维进行研究,对共同性斜视进行病因学探讨。
1 材料和方法
1.1 材料:收集福建医科大学附属第一医院眼科中心2006年1月至2006年11月共12例共同性斜视患者弱侧眼外肌作为实验组,其中内斜视7例,外斜视5例;男性6例,女性6例;年龄最小7岁,最大25岁,平均14岁;于斜视矫正手术中取其缩短的直肌为标本。收集同期无眼肌疾患行眼球摘除的患者6例作为对照组,于手术中取其直肌为标本。所有标本在离体后用显微手术剪剪成2部分,均为4×4×2mm大小,一份立即置于10%甲醛中性固定液中,石蜡包埋,待用;一份速存于液氮速冻后-80℃保存,待用。
1.2 主要试剂:三磷酸腺苷二钠盐(ATP 产地美国,购自上海捷瑞生物工程有限公司);鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体(购自北京中杉公司);鼠抗人骨骼肌肌球蛋白单克隆抗体(购自北京中杉公司); PV9000二步法检测系统(美国GBI公司产品,购自北京中杉公司)。
1.3 酸性前孵育肌球蛋白ATP酶染色法:取低温冷冻标本,确定方向,用恒冷冰冻切片机-20℃下做横向连续切片(肌纤维横断面),厚8μm;取一份切片置于酸性前孵育液的切片缸中,室温下作用5分钟;置于贮备液中作用3分钟;放入孵育液切片缸,在37℃恒温箱中,作用1小时;取出标本直接置于2%的氯化钻溶液(临时配置)中作用3分钟;流水浸洗5分钟;置于1%的硫化胺溶液(临时配置)中作用30秒;流水浸洗5分钟;待干燥后用国产中性树胶封片。
1.4 观察方法:光镜下观察mATPase染色和免疫组化染色结果。ATP酶染色在pH值为4.4的酸性前孵育液处理后快肌纤维不着色或染成淡灰色,慢肌纤维染成深黑色。肌动蛋白和肌球蛋白阳性反应为棕黄色颗粒,主要表达于细胞浆,在放大200倍下对热点视野以OLYMPUS BH2显微摄像系统对切片进行摄像,每张切片取5个视野,每个视野取100个肌纤维作形态学图像分析(JEDR 801D形态学图像分析系统6.0软件,福建医科大学组胚教研室提供),取平均光密度值,数据以'均数标准差“表示。
1.5 数据统计分析方法:运用SPSS 11.5软件包对数据进行处理。组间差异采用成组t检验方法,检验水准α=0.05。
2 结果
对照组切...
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