植物病原菌快速检测技术方法
[摘 要] 本文开展对比试验研究环介导等温扩增（LAMP）对于植物病原菌的快速定量检测效果，结果表明LAMP体系能够准确、快速地检测出植物病原菌，可以在田间或其他现场推广应用。
[关键词] 植物病害；病原菌；快速检测技术
[中图分类号] S432.4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-7909（2017）29-64-1
植物病害是限制农作物产量和品质的主要因素之一。在农作物种植前或收获后进行植物病原菌检测，不仅可以对病害进行提前预警，也可以检测农产品的品质。传统的植物病原菌分子生物学检测方法往往需要在实验室进行，并且需要借助多种专业的仪器设备。为了在田间或其他现场能够对病原菌进行快速定量检测，利用便携且操作简单的仪器设备进行病原菌检测显得尤为重要。经过分析发现，环介导等温扩增（LAMP），是近年来兴起的一种新的聚合酶链式扩增反应体系，这种方法只需要一个恒定的反应温度，所使用的反应仪器简单。
1 试验材料
待检测的病原菌包括禾谷镰刀菌、肿囊腐霉菌、弯孢叶霉菌和玉蜀黍黑粉菌。阴性对照为去离子H2O。
2 试剂和仪器设备
试验试剂包括反应DNA扩增试剂盒（广州迪澳生物科技有限公司）。每种病原菌对应一套LAMP引物，每套引物均由6条引物组成。
反应在广州双螺旋基因科技有效公司生产的ZYD-S1荧光恒温扩增仪器（见图1）上进行。反应温度设定为63 ℃，反应时间设定为45 min。反应结束后，根据仪器自带的程序判断反应结果。
3 试验方法和结果
禾谷镰刀菌、肿囊腐霉菌、弯孢叶霉菌和玉蜀黍黑粉菌的DNA和去离子H2O分別作为反应的模板配制反应体系。反应管在ZYD-S1加热模块上的布局如图2所示：阴性对照（A1/B1，A6/B6，A7/B7，A8/B8），禾谷镰刀菌（A2/B2），肿囊腐霉菌（A3/B3），弯孢叶霉菌（A4/B4）和玉蜀黍黑粉菌（A5/B5）。反应完成后，根据反应自带程序产生的扩增曲线图可以看出：所有的阴性对照均没有有效扩增，而4种植物病原菌均产生有效的扩增（见图3）。这就表明LAMP体系能够准确、快速地检测出植物病原菌。
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