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斑马鱼一种母源凝集素基因zfol的原核表达和抗体制备分析

材料写作网    时间: 2020-09-18 04:05:30     阅读:

摘 要:zfol是斑马鱼的一种母源凝集素基因。从斑马鱼胚胎中提取RNA,应用RT-PCR从斑马鱼中得到zfol的基因片段,重组入原核表达载体pEASY-E2中得到重组质粒,并测序鉴定其序列的正确性,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中诱导表达,并纯化蛋白,利用纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备斑马鱼母源凝集素Zfol蛋白的多克隆抗体,利用Western-blot方法检测抗体特异性,得到特异的多克隆抗体,为进一步研究母源凝集素基因zfol的功能奠定了基础。

关键词:斑马鱼;zfol;原核表达;多克隆抗体

中图分类号 S965.299 文献标识码 B 文章编号 1007-7731(2013)06-14-03

免疫系统是机体执行免疫应答及免疫功能的一个重要系统,保卫机体免受疾病的危害,免疫系统以基本的免疫系统(以酶的形式存在于细菌中免受噬菌体感染)或者复杂的免疫系统(人体内)存在于所有生物体中。另外一些基本的免疫机制是从古老的真核生物演变而来,存在于后代生物中,例如植物和昆虫,包括吞噬作用,抗菌类多肽如防卫素,以及补体系统[1-2]。大多数鱼类在尚未发育完全时,其对外界病原微生物仍然具有一定的抵御能力,这种抵御能力主要来自于自身非特异性免疫和母源性免疫。而存在于卵母细胞中的凝集素、溶菌酶等物质被认为是来自于母体的免疫物质,并且在鱼类胚胎发育中可能发挥重要作用[3]。目前对鱼类胚胎发育早期的先天免疫机制的研究已经成为鱼类免疫学研究的重点领域,主要是由于鱼类在胚胎发育早期的致死率较高[4-5]。

斑马鱼作为新型模式生物,具有以下优点:成年鱼个体小,易于饲养;胚胎体外发育,易于观察和操作;品系资源丰富;发育快速、性成熟期短、繁殖力强,以利于提供充足的实验材料;较完善的胚胎和遗传学操作技术,如转基因、基因过表达等技术。近年来随着对斑马鱼研究的不断深入,其应用范围已经涵盖鱼类免疫系统发生、病原和宿主研究的各个方面[6-7]。笔者试图通过构建母源凝集素zfol基因原核表达载体,制备多克隆抗体,并用此抗体检测斑马鱼中该基因的表达,为进一步研究该基因的功能提供条件,也为深入研究母源凝集素基因在鱼类胚胎发育早期的免疫保护作用中扮演的角色奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料 斑马鱼(Danio rerio),选取生命力旺盛,具有活跃繁殖力的适龄斑马鱼,由中国海洋大学分子医学生物学实验室提供。

1.2 酶及相关试剂 限制性内切酶购自NEB;T4连接酶购自Promega;胶回收...

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