一种平菇褐斑病病原菌的鉴定

材料写作网    时间: 2020-08-07 04:33:08     阅读:次

摘 要:本文将从平菇（Pleurotus ostreatus）褐斑病中分离纯化的240多个菌株中，选出使平菇褐斑病发病快且病情严重的菌株PG1702，对其进行致病性试验，结果表明菌株PG1702为引起平菇细菌性褐斑病的病原菌；显微形态的观察和扩增出的16S rDNA序列与GenBank比对结果表明菌株PG1702为托拉斯假单胞杆菌（Pseudomonas tolaasii Paine）。

关键词:平菇；褐斑病；托拉斯假单胞杆菌

我国作为食用菌生产大国,总产量约占全世界的70%以上,而平菇是我国北方的重要栽培种类。最近几年北方平菇种植地区平菇褐斑病大面积发生，此病一旦发生，传播迅速，很难防治，造成了严重的经济损失。褐斑病已经影响了菇农的经济效益,因此加快对褐斑病的研究、探索有效的预防控制手段迫在眉睫。本研究将形态鉴定方法与分子生物学技术相结合，对引起平菇褐斑病的病原菌进行鉴定，旨在为进一步研究该病害奠定基础。

1 材料与方法

1.1材料

平菇褐斑病菌株: 2007年8月～2008年10月，从辽宁、山东以及北京周边地区采集大量平菇褐斑病病样，共分离纯化了240多个菌株。

平菇:品种是397,由中国农科院农业资源与农业区划研究所张金霞老师提供菌种，本实验室栽培。

1.2培养基

NA培养基：牛肉浸膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g,琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.0。

KB培养基：蛋白胨20g，甘油10g，MgSO₄1.5g，K2HPO₄1.5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2。

LB培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 000 mL，pH 7.0。

平菇培养料：棉籽壳86.8%，麦麸13%，生石灰0.2%，含水量58%。

1.3平菇栽培方法

采用23 cm×35 cm的聚乙烯塑料袋，每袋装料量1 kg。养菌期间，温度、相对湿度控制在25 ℃、65 %左右，发菌天数约为25 d。出菇期温度控制在12～17 ℃、空气相对湿度控制在70%左右，给予散射光照，适当通风，当子实体直径生长到1～2 cm左右时开始接种试验。

1.4致病性测定

将根据参考文献［1］分离纯化的菌株在NA平板上25 ℃培养72～96 h，将细菌刷下配置成3×108个/mL的悬浮液20 mL，待平菇子实体直径为1～2 cm左右时,用毛笔将1 mL菌悬液均匀涂抹在子实体上,针刺法接种［2］，设置清水对照,3次重复。接种后保湿24 h［2］,之后进行常规管理，并开始观察发病情况,选出使平菇褐斑病发病快且病情严重的菌株。

1.5病原菌微观形态观察［3...

== 试读已结束，如需继续阅读敬请充值会员 ==

本站文章均为原创投稿，仅供下载参考，付费用户可查看完整且有格式内容！ (费用标准：38元/2月，98元/2年，微信支付秒开通！)

升级为会员即可查阅全文 。如需要查阅全文，请 免费注册 或 登录会员