核酸疫苗
摘 要 核酸疫苗自出现以来，就以高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点，作为一种新型的疫苗而得到广泛的研究和应用。核酸疫苗不仅有预防疾病的作用，同时还具有治疗疾病的作用。在不久的将来，核酸疫苗有望成为人类防治疾病的重要手段。
关键词 核酸疫苗 抗原基因 免疫机制
中图分类号 Q-3文献标识码 E
20世纪90年代初，一系列关于注射外源基因在体内诱导免疫应答的报道揭开了核酸疫苗研究的序幕。由于核酸疫苗可以诱导机体产生全面的免疫应答，并且对不同亚型的病原体具有交叉防御作用，同时又具有安全、可靠、生产方便等优点，故被认为是继减毒、灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。核酸疫苗就是把外源基因克隆到真核质粒表面载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到动植物体内，使外源基因在活体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，引发免疫反应。
1 核酸疫苗的构建
核酸疫苗的构建是通过重组DNA技术，将抗原基因定向插入哺乳动物细胞表达载体，转入宿主细胞后，筛选并获得重组克隆的过程，可以分为以下4个过程：抗原基因和载体的制备；抗原基因和载体的连接；重组DNA导入宿主细胞；重组分子的筛选与鉴定。
1.1 抗原基因和载体的制备
抗原基因只有在正确的方向，正确地读框插入载体中的启动子下游才能被表达。因此，在核酸疫苗的构建过程中必须保证抗原基因的定向插入或插入载体后鉴定抗原基因的方向。其中，抗原基因的定向插入是较为直接和有效的方法。要做到抗原基因的定向插入，必须是抗原基因两端分别带有各不相同的限制内切酶的黏性末端。而载体两端也需带有能与抗原基因两端分别互补配对的黏性末端；如抗原基因两端的限制酶位点与载体不符，可通过克隆载体更换限制酶位点或设计需要限制酶位点的PCR引物，做PCR来达到目的。
1.2 抗原基因和载体的连接
1.2.1 全同源粒性末端连接
DNA插入片断与载体用相同的内切酶切开，两者的两端具有相同的抗原基因和载体的连接黏性末端，这种连接称为全同源黏性末端连接。
1.2.2 定向克隆
使外源DNA片段定向插入到载体分子中的克隆方案称为定向克隆。定向克隆是用2个不同的限制性内切酶切割目的DNA分子，产生2个不同黏性末端来实现的。
1.2.3 平末端连接
有些限制性内切酶切割靶DNA的2条链不产生突出端（粒端）而产生平末端（平端）。平端之间的连接效率比粒端之间的连接...
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