可溶性啮齿目动物CD59功能多肽的制备及生物活性鉴定
摘 要：构建含啮齿目动物小鼠的CD59a功能片段及6×His键的质粒载体，将其转染入原核生物表达体系BL21大肠杆菌，扩增，裂解细菌，层析柱纯化，得到CD59a功能多肽，并运用SDS-PAGE鉴定其分子量，经典及替代途径溶血实验鉴定其生物活性。结果表明：利用基因工程的方法在原核BL21大肠杆菌表达体系中可制备有良好的抑制补体溶血活性的小鼠CD59a功能多肽，其分子量约18.4KDa，为啮齿目动物CD59的功能研究以及进一步的动物实验奠定了基础。
关键词：CD59；原核生物表达体系；生物工程
中图分类号 Q78 文献标识码A文章编号1007-7731（2014）13-23-03
CD59是一种以糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚着于细胞膜表面的补体抑制蛋白，广泛分布于动物多种组织细胞表面，并能以游离形式存在于尿液、唾液、泪液等多种体液中。CD59在补体系统激活后的酶级联反应的终末，阻碍C8与C9分子的结合，抑制补体终末反应物MAC（C5b－C9n复合物）的形成，从而保护细胞免受MAC导致的细胞裂解效应［1-2］。故CD59与动物的免疫系统密切相关，可抵御病原微生物激活补体对动物组织细胞的杀伤作用，是动物自体免疫调节的重要膜蛋白。获得具有良好生物活性的CD59功能多肽，有助于对CD59功能的进一步研究。笔者尝试应用组织工程技术，利用原核的大肠杆菌BL21表达体系制备重组啮齿目动物小鼠的CD59a功能部位多肽，并应用溶血实验鉴定其生物学活性，为啮齿目动物CD59的功能研究以及进行进一步的动物实验奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 研究对象 BL21大肠杆菌，由中国科技大学大分子结构与功能实验室提供；Pat28a质粒（其图谱见图1）：his键连接位点为Ndel，购自美国novagen公司。
1.1.2 主要试剂 IPTG （isopropyl beta-D-thiogalactoside，I prepared at 1 M），美国invitrogen 公司；BugBuster Master Mix 细胞裂解液，美国novagen公司；cocktail 蛋白酶，美国novagen公司；SDS-PAGEmarker，美国TEDIA公司；His－Bind 纯化Kit，美国Novagen 公司。
1.1.3 主要仪器 -80℃深低温冰箱，美国Farma Scientific公司，Eppendorf5414台式高速离心机，德国Eppendorf公司；Eppendorf5810R台式高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司；紫外分光光度计UVC-515型，美国ULTRA-LUM公司；恒温细菌培养摇床，美国lab-line instruments公司；垂直电泳仪，美国Bio-Rad公司；Vortex-Genie 2多功能旋涡混合器，美国Scientific...
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