兔慢性肺动脉栓塞的比较蛋白质组学研究
【摘 要】目的：探讨慢性肺动脉栓塞疾病肺组织的差异蛋白，并对差异表达进行进一步验证。方法：制备肺动脉栓塞动物模型20只，对照组20只，进行肺组织蛋白质组学差异比较。结果：通过检测发现，观察组患者的蛋白组分含量较对照组均较低，其中APOL1差异最明显，比值为0.34（p<0.05）。结论：APOL1可以作为慢性肺栓塞临床诊断的危险因素之一。
【关键词】慢性肺动脉栓塞；蛋白质组学
【中图分类号】R563.4 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0468-01
慢性血栓栓塞性肺动脉高压栓子来源于急性肺动脉栓塞或者长期的原位肺动脉栓塞造成的，它是初始血栓溶解不全、深静脉血栓反复脱落造成的[1]。本研究从蛋白质水平上，通过比较分析慢性肺动脉栓塞症发生过程中的差异蛋白表达谱以及特异标志蛋白，为慢性肺动脉栓塞症的诊断、治疗以及发病机制提供理论依据。现将方法与结论阐述如下：
1 材料与方法
1.1 建立兔慢性肺动脉栓塞疾病模型
血凝块注入法造模：取体重在2.5kg左右的新西兰大白兔40只，分为实验组与对照组。1%戊巴比妥腹腔注射麻醉。从腹主动脉中抽取2ml左右血液，置于含有凝血酶的器皿中，静置24小时，等渗氯化钠溶液冲洗，去掉血清，将栓子剪成0.5mm大小。加入少量生理盐水后，将25个栓子注射入实验组大白兔颈静脉中，2周后再次注射栓子造模。对照组单纯注射生理盐水。通过肺动脉血管造影检查确定造模成功。肺动脉栓塞动物模型20只，对照组20只。
1.2蛋白质提取
取2g实验组与对照组肺组织，将其放置在研钵中，置于冰上行低温操作，用眼科剪将椎间盘剪成大小为1mm×1mm×1mm。液氮冰浴条件下将肺组织研磨碎，置入5.0ml Eppendorf 管中，将1g肺组织加入2.5～3ml裂解液中，振荡60分钟，20，000g/min，4℃离心1小时，进行蛋白质浓度定量检测。
双向凝胶电泳（2-DE）：包括了IFE和SDS-PAGE等步骤。
IFE：分别用已加入18 mM DTT的泡胀液Ⅰ含400μg蛋白的样品至255μl，混匀后加入IPG胶条槽中。IPG胶条（13cm，3-10NL）胶面朝下放入胶条槽中，均匀接触泡胀液并不留气泡，加700μl胶条覆盖液，减少蒸发和尿素结晶，槽上加盖，置于IPG Phor水平电泳仪电极板上，盖上安全盖。泡胀和聚焦在20℃下自动进行，25μA/胶条，总伏小时约55-60Kvh。
SDS-PAGE ：
1.2.1 平衡：等电聚焦电泳结束后，用双蒸水将IPG胶条上的覆盖液洗掉，水沥净，IPG胶条放入试...
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