2株H9亚型禽流感病毒的分离鉴定
[摘 要] 本文从山东省某鸡场采集的疑似禽流感的病料样品中分离出2株病毒，通过RT-PCR及测序分析，鉴定该毒株为H9亚型禽流感病毒（AIV）。序列比对结果显示，常见疫苗株SS 94株、F98株等属于A/DK/HK/Y280/97-1ike分支中的1.2亚分支，而分离出的2株H9毒株均属于欧亚谱系A/DK/HK/Y280/97-1ike分支1.1亚分支，与常见疫苗株不在同一亚分支上，提示分离毒株与常规疫苗株相比，已发生较明显的遗传变异。
[关键词] 禽流感病毒；H9亚型；分离；鉴定
[中图分类号] S852.65 [文献标识码] A [文章编号] 1674-7909（2017）32-72-2
禽流感属于正黏病毒科流感病毒属，是由A型流感病毒（Avian Influenzavirus，AIV）引起的一种禽类感染或疾病综合征，被国际兽疫局定为A类传染病。根据A型流感病毒表面抗原””血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的不同，目前将禽流感病毒（AIV）分为16种HA亚型（H1～H16）和10种NA亚型（N1～N10）。
根据禽流感对禽类致病性强弱的差异，AIV可分为高致病性禽流感和低致病性禽流感2种。目前，我国鸡群中存在的主要是低致病性禽流感[1-2]，感染该病毒后通常没有特征性症状，死亡率不高，但能够使产蛋鸡产蛋率下降，降低雏鸡的免疫抵抗力，易受到其他病毒病及支原体感染而发生严重的呼吸道疾病，影响生产性能。近年来，国家相关实验室临床监测显示，国内商品肉鸡发病死亡鸡群中H9N2亚型禽流感感染率为72%～85%，鸡只感染H9亚型禽流感后通常会引起新城疫、传染性支气管炎等其他病毒病，而且继发大肠杆菌、沙门氏菌细菌、支原体等疾病。
本试验研究对2017年在山东地区分离得到的2株禽流感毒株进行分离鉴定，进一步对阳性结果进行测序，旨在进一步了解山东地区的H9亚型禽流感的流行情况，为H9亚型禽流感进一步的防控和疫苗研制提供科学依据。
1 试验材料
1.1 病料样品、鸡胚
2017年6月，从山东地区采集鸡场病死鸡的肺、肾、脾、肝等脏器病料样品。9～11日龄SPF鸡胚和种蛋，购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。
1.2 试验试剂
RNA提取试剂盒购自Takara公司，反转录试剂盒购自TIANGEN公司，2×Taq PCR Master Mix购自Promega公司。
1.3 试验仪器
培养箱、微量振荡器、孵化机、生物安全柜、超净工作台、分析天平、离心机、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪、液氮罐或-70 ℃冰箱、微波炉、高通量研磨器、-20 ℃冰箱和水浴...
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