家蚕抗菌肽基因BmMoricin的克隆及重组蛋白的自诱导表达
摘要：抗菌肽是构成昆虫体液免疫的主要方式，BmMoricin是家蚕免疫系统中1种重要的抗菌肽，具有极强的抑菌活性。以家蚕中肠组织总RNA为模板，设计1对特异性引物，通过RT-PCR技术扩增BmMoricin，构建pET32a-BmMoricin原核表达载体，采用自诱导表达系统表达BmMoricin重组蛋白。结果表明，BmMoricin基因片段的大小为201 bp，编码66个氨基酸，自诱导表达的BmMoricin重组蛋白大小约为19 ku，表达产率比异丙基-β-D-疏基半乳糖苷（IPTG）诱导的重组蛋白表达产率高，为BmMoricin抗菌肽的生物学活性鉴定及应用奠定了基础。
关键词：家蚕；抗菌肽；BmMoricin；重组蛋白；自诱导
中图分类号： Q785；S8812+4文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2017）21-0052-03[
收稿日期：2016-06-30
基金项目：云南省大学生创新创业训练计划（编号：DCXM163018）；红河学院大学生科技创新项目（编号：SZ1520）；红河学院应用型科学研究项目（编号：XJY15Z07）；红河学院博士专项（编号：XJ15B13）。
作者简介：谢昆（1975”），男，云南昆明人，博士，副教授，主要从事动物生物化学与分子生物学研究。E-mail：xk_biology2@126com。
在昆虫细胞中，天然免疫是主要的免疫屏障，抗菌肽在阻止微生物入侵和预防感染方面具有重要的作用，抗菌肽具有分子量低、热稳定性强、抗菌性广谱、抑菌活性强等优点[1]，绝大部分的抗菌肽由复杂的基因家族编码，因此大量的抗菌肽是宿主抵抗微生物感染的主要方式[2-3]。在细胞内抗菌肽的诱导表达受Toll和IMD信号途径的调控[4]，然而，抗菌肽的生物学功能也各有差异，抗菌肽Cecropins和Moricin具有极强的抗革兰氏阳性和革兰氏阴性菌活性，但抗真菌活性较弱，而Drosomycin具有极强的抗真菌活性，不同的抗菌肽家族成员之间抗菌机理也不同[5-6]。在家蚕细胞中，家蚕抗菌肽BmMoricin最先是从家蚕血淋巴中分离得到，主要对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有抑菌活性，BmMoricin包含61个氨基酸残基，前22个形成预测的分泌肽，成熟的BmMoricin含39个氨基酸，通过其氨基端α-螺旋插入到细菌质膜，增加细菌的渗透压来抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，在BmMoricin[CM（215]家族的12个基因成员中，含8个B亚家族（BmMoricin B1～B8）、3个A亚家族（BmMoricin LA1～LA3）、1个BmMoricin基因，它们在家蚕抵抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌方面具有极其重要的作用[7]。自诱导表达系统是Studier于2005年发现的...
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