罗氏沼虾野田村病毒3种检测方法比较
摘要：胶体金免疫层析技术、RT-PCR、RT-LAMP 采用的抗体和特异性引物均针对罗氏沼虾野田村病毒的衣壳蛋白和编码基因RNA2。采用这3种方法分别检测罗氏沼虾野田村病毒（Macrobrachium rosenbergii Nodavirus，MrNV），结果表明，免疫胶体金检测试纸能快速检测感染罗氏沼虾野田村病毒的幼虾，但灵敏度较低，能用来检测具有疑似病症的样品；RT-PCR和RT-LAMP检测灵敏度都优于免疫胶体金检测试纸，但RT-PCR方法操作步骤繁琐，所耗时间较长，而RT-LAMP方法操作简便、用时短、不需要特殊仪器，在产物中加入核酸染料后检测结果可用肉眼直接判定。因此，RT-LAMP方法更适合基层和现场检测，其相关试剂盒的研发更具有应用前景。
关键词：罗氏沼虾野田村病毒；免疫胶体金技术；RT-PCR；RT-LAMP；检测
中图分类号： S945.4+19文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）10-0214-03
收稿日期：2013-12-19
基金项目：公益性行业（农业）科研专项（编号：201103034）；浙江省湖州市科技项目（编号：2012GN08、2011ZD2005）；浙江省淡水养殖科技创新团队建设（编号：2012R10026-11）。
作者简介：林锋（1980”），男，硕士，助理研究员，主要从事水产病原微生物研究。E-mail：wwlinfeng@163.com。
通信作者：刘莉，副研究员，从事水产动物病害防治研究。E-mail：liuli6655@hotmail.com。罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）是一种生长快、病害较少、易养殖的淡水养殖虾，目前已经成为我国淡水养殖的主要品种之一，江浙一带是主要产地。罗氏沼虾野田村病毒（Macrobrachium rosenbergii Nodavirus，MrNV）是危害罗氏沼虾淡化苗的主要病毒，会导致病虾肌肉出现白斑、白浊或全身发白，通常被称为罗氏沼虾白尾病（white tail disease，WTD），严重时死亡率高达90%以上[1]，对罗氏沼虾养殖业造成极大的危害，已被列为OIE申报疫病和我国水生动物二类疫病。2011年至今，广东、浙江、江苏、上海等地连续几年在罗氏沼虾幼苗抽检中均检测到该病毒，对该病毒的防控工作还有待加强。目前，罗氏沼虾野田村病毒的检测方法有电镜法、病毒核酸鉴定法、RT-PCR检测法、TAS-ELISA检测法等[2-6]，其中，RT-PCR是现今最为常用、也是最为经典的检测方法。环介导等温扩增法（loop-mediated isothermal amplication，LAMP）是近年发展起来的一种新颖的核酸扩增技术，在恒温条件下高效扩增核酸，具有高特异性、快速灵敏、高效、操作简...
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