甘肃省苹果炭疽病病原鉴定及ITS序列分析
摘要：果实炭疽病是苹果生产中常见的重要病害之一。通过形态特征结合病原菌的内部转录间隔区（internal transcribed spacer sequence，简称ITS）区域比对分析，确定引起甘肃苹果果实炭疽病的病原为胶孢刺盘孢（Colletotrichum gloeosporioides）。
关键词：甘肃省；苹果炭疽病；胶孢刺盘孢（Colletotrichum gloeosporioides）；ITS序列分析
中图分类号： S436.611.1+2文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2017）10-0089-02
果实炭疽病是苹果生产中普遍发生的重要病害，包括果实上的苦腐病（bitter rot of apple）和叶片上的叶枯病（glomerella leaf spot）[1]。典型的苹果炭疽病病菌通常仅危害果实，引起果实表面形成圆形病斑，后期产生呈同心轮纹状排列的小粒点，病部横切剖面呈圆锥形，果肉变褐腐烂，具苦味[2]。苹果炭疽病在世界上所有气候温暖湿润、适宜种植苹果的国家和地区都有发生，如美国、澳大利亚、英国、法国、德国、丹麦、保加利亚、荷兰、俄罗斯、巴西、墨西哥、日本、韩国等[3]。苹果果实炭疽病通常在果实近成熟时开始发病，采收后贮藏期间继续发展，造成采前大量落果和采后贮藏中发生果腐，病果率达30%左右，严重可达50%～60%，我国每年因炭疽病造成的果品采后损失为20%～30%，采后果实腐烂已是生产中的突出问题[4]。2013年笔者调查了甘肃省苹果主产区果实炭疽病的发病率，通常在0.8%～13.6%，属轻、中度发生。通过采样和室内分离鉴定，旨在明确病原菌的种类，为生产中科学制定防控策略提供依据。
1材料与方法
1.1病样标本采集及病原菌分离
2013年9月从甘肃省陇南市礼县永平乡、永兴乡、祁山乡、天水麦积区伯阳镇、清水县永清镇等苹果主产区采集炭疽病标样，苹果品种为红元帅。病原菌的分离采用常规组织分离法，对采集的标样进行分离纯培养后，将菌种保存在试管斜面上。[JP]
1.2致病性测定
致病性测定参照张荣等的方法[5]。选择有代表性的菌株，将供试菌株移于PDA（potato dextrose agar）培养基斜面上培养，7 d后用无菌水洗下分生孢子，配置成分生孢子悬浮液，浓度为1×105 个/mL。取健康的红元帅苹果，用自来水清洗表面，70%乙醇表面消毒，自然风干，将捆扎在一起的5根7号昆虫针于乙醇灯上烧灼消毒，冷却后，扎刺果实，形成深度2.5 cm 的伤口，用移液枪向伤口中注入20 μL孢子悬浮液，25 ℃恒温箱内保湿培养。对照用无菌水接种。每处理设3个重...
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