五峰马里兰烟空茎病病原鉴定
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摘要：在实验室对从五峰马里兰烟空茎病病株分离的病原菌进行了形态学观察、致病性鉴定和部分生物学特性研究。结果表明，分离物在LB培养基上的菌落淡黄色，圆形或不定形，表面光滑，微凸起，半透明，边缘整齐。在电镜下观察，菌体短杆状，大小（0.5～1.0） μm×（2.2～3.0）μm，周生鞭毛2～8根，无荚膜，不产生芽孢，革兰氏染色阴性。在结晶紫果胶酸盐（CVP）培养基上产生杯状凹陷。病菌能在5%盐浓度下生长，能在37 ℃下生长，能利用蔗糖发酵产酸，兼性厌氧，能利用柠檬酸盐，但不能产生吲哚。结合该菌形态学特征、致病性和部分生物学特性，初步确定引起五峰马里兰烟空茎病的病原为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种（Pectobacterium carotovora subsp. carotovora）。
关键词：五峰马里兰烟；烟草；空茎病；病原鉴定；胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种
中图分类号：S435.72 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）18-4388-02
五峰马里兰烟是湖北省宜昌市烟草公司1981年从美国引进的低焦油含量烟草品种，现定名为五峰1号[1]，作为优质烟叶品种在五峰县推广。烟草空茎病因感染后茎干中空腐烂而得名[2]。伴随着五峰县马里兰烟种植面积的扩大，空茎病成为制约五峰县烟叶发展的一种主要病害[3]，为此，于2011年开始对其危害情况进行调查，开展病原菌鉴定、生物学特性研究。
1 材料和方法
1.1 供试材料
分离病株分别采自于湖北省五峰县付家堰乡火山村、大龙坪村烟田，选取具有典型症状的烟叶和茎干。
1.2 试验方法
1.2.1 病原菌的分离纯化 切取新鲜病叶、病茎病健交界处组织， 经75%乙醇和0.1%氯化汞溶液表面消毒， 无菌水冲洗后加无菌水研磨制成悬浮液， 采用平板划线法分离[4]。分离培养采用结晶紫果胶酸盐（CVP）培养基[5]。将划线后的培养皿置于28 ℃培养箱， 2 d后出现杯状凹陷菌落。5 d后选取单个菌落在LB培养基上进行纯化培养[4]。
1.2.2 致病性测定 将分离纯化的病原菌在LB培养基上活化培养2～3 d，加5～10 mL无菌生理盐水制成菌悬液。灭菌土中栽培烟叶的幼苗长到5～6片叶时采用注射接种法进行接种，用注射器缓慢地把 1 mL液体LB 培养基菌悬液注入到...
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