莲藕贮藏期主要致病真菌分离鉴定及其致病相关酶酶学特性研究
摘要：分别用组织分离法、直接挑取法和组织浸液划线法对贮藏期患病莲藕的病原菌进行分离，分离得到9种真菌，经回接发现9种真菌均致病。再通过形态学鉴定，初步确定9种真菌中有3种分别属于青霉属（Penicillium）、交链孢霉属（Alternaria）和芽枝孢霉属（Cladosporium），其他6种属于镰刀菌属（Fusarium），其中1株可产生红色素的镰刀菌的致病能力最强。选择产红色素的致病性最强的镰刀菌，通过测定活体外和活体内的聚甲基半乳糖醛酸酶（PGM）和羧甲基纤维素酶（Cx）2种细胞壁降解酶活性的变化研究该病原菌的致病机理，结果显示，在活体外，PMG的活性随着培养时间延长先增加后降低最后到基本不变，而Cx活性则持续缓慢增加，即在前期主要是PMG起作用，后期则主要是Cx起作用；在活体内，接菌的莲藕的PMG和Cx活性显著高于未接菌的藕（P＜0.05），说明PGM和Cx这2种细胞壁降解酶在病原菌的致病过程中起到了重要作用，是重要的致病因子。
关键词：莲藕；腐烂；病原菌；镰刀菌属；聚甲基半乳糖醛酸酶；羧甲基纤维素酶
莲藕是集果、蔬、药为一体的优质蔬菜，具有很高的营养价值、药用价值和经济价值。除鲜食外，还可作藕粉、莲藕汁饮料、速冻藕片、脱水藕片、清水藕、盐水藕、藕脯等加工制品[1]。近年来莲藕的种植面积逐步增大，并以水煮藕、盐渍藕、速冻藕和真空保鲜藕等形式出口到美国、日本和新加坡等国家[2]。但是莲藕采挖后，暴露于空气中易出现褐变、干缩、霉烂等现象，制约了莲藕贮藏、运输及出口销售产业的发展。目前针对莲藕已经开发出了系列抗褐变剂，结合涂膜、真空、低温等保鲜技术可以较好地控制褐变，然而在低温贮藏过程中霉变依然严重影响贮藏鲜藕的商品性。因此本研究对低温贮藏条件下霉变的莲藕，分离鉴定引起贮藏莲藕霉变的主要病原微生物，从酶学角度分析主要致病菌的致病机理，为低温贮藏条件下保持莲藕的新鲜度和品质提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验材料
供试材料取自2010年5～6月贮藏于4～10℃条件下，有典型的发霉或腐烂症状的莲藕；人工回接莲藕购于华中农业大学菜市场，品种皆为鄂莲5号（品种代号：3735）。CM304冻干血浆为北京陆桥技术有限责任公司生产。氧化酶试剂由法国biosMerieumx生产。
1.2主要培养基
马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂粉20 g，蒸馏水1 000 mL[3]。
1.3真菌的分离纯化
为抑制细菌污染，先在200 mL PDA培养基...
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