春季保护地小型西瓜苗期枯萎病和叶枯病初步鉴定
摘 要：随着春保护地西瓜种植面积的扩大和工厂化育苗的发展，西瓜苗期病害也越来越严重，有些常见于生长期的病害，现在在苗期也有较重发生。对湖北省宜城市流水镇育苗场采集的2份西瓜苗期病样，进行分离、纯化并回接病原菌，然后利用PCR扩增真菌保守的ITS序列，初步确定所采集病样1-a的致病菌为枯萎病病原菌[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. niveum （E. F. Smith） Snyber et Hansen]，病样1-b的致病菌为叶枯病病原菌[Alternaria cucumerina （Ell. et Ev.） Elliott]。本研究利用分子鉴定手段，避免了传统分类方法的繁琐、耗时和结果不稳定性等缺点。
关键词：西瓜；枯萎病；叶枯病；苗期病害
中图分类号：S436；S651 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2013）16-0068-03
早春保护地西瓜上市早，价格高，经济效益好，近年来在湖北发展较快，其对西甜瓜嫁接苗的巨大市场需求促进了工厂化育苗的快速发展。但由于部分小型育苗场设施简陋，环境调控能力差，加上不注重种子处理，苗期频发多种病害。2012年3～4月，湖北省低温阴雨持续时间长，宜城市小型苗场发病较重。湖北省农业科学院经济作物研究所对其中发生较为普遍的2种病害进行了分离、鉴定，以期对其防治起到指导作用。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
从湖北宜城市流水镇育苗场西瓜苗上采集病样，图1-a病样的病部有粉红色霉状物，图1-b病样的病部呈水渍状，用组织分离法[1]分离病原菌，然后纯化、保存。
1.2 致病性测定
根据柯赫氏法则[2]进行寄主活体接种，接种菌丝，以清水为空白对照，3次重复。出现田间相同的症状时再次分离，并将2次获得的分离菌作比较，以确定该菌病原菌。
1.3 DNA提取
将病原菌菌块移至马铃薯蔗糖培养基（PSA）平板上，25℃黑暗条件下培养48～72 h，然后将菌落边缘的菌丝切成2～3 mm的菌落小块，把4～5块菌丝移至PSA液体培养基，28℃、180 r/min振荡培养2 d。将液体培养好的病菌菌丝，在双层尼龙网上过滤，用水洗涤2次，以除去菌丝内的培养液，收集菌丝，将其包好放在硅胶中过夜，吸干水分，用液氮研磨成粉末，参照Knapp等[3]报道的CTAB （Cetyltrim-ethyl ammonium bromide）法提取病菌菌丝DNA。
①PCR引物 病原菌rDNA的ITS区域PCR扩增选用的引物分别为ITS-F和ITS-R，其碱基序列如下[4]：ITS-F（5"-GTCCTAACAAGGTTTCCGTA-3"），ITS-R（5"-TTCTCCGCT TATTGATA...
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