抗DNA多克隆抗体免疫胶体金针对接触性DNA孵育条件的建立
打开文本图片集
【摘 要】文章利用免疫胶体金的生物化学特性，吸附反应体系中的DNA，通过离心将其分离，并经过洗涤再离心，沉淀可直接用于PCR反应。实验结果表明：5μL和10μL免疫胶体金在室温下振荡孵育15 min对接触性DNA有足够的吸附能力。
【关键词】抗-DNA多克隆抗体;胶体金;接触性DNA
【中图分类号】D919.2 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2018）12-0041-02
当前公安实战中，现勘人员提取到的接触类检材越来越多，而接触类检材样本中DNA含量很少，甚至存在大量PCR抑制剂，使得这类检材检出成功率很低。因此，我们需要探索一种能有效提高接触类检材检测成功率与准确性的方法。
胶体金是氯金酸（chLoroaurie acid，）在还原剂如抗坏血酸、白磷、鞣酸和枸橼酸钠等作用下，由于静电作用而成为一种稳定的胶体状态，聚合成带负电的疏水胶溶液。金颗粒为核，表面吸附和双层离子，能与蛋白质分子以及其他非共价生物大分子如酶、抗生素、多肽、激素、毒素等正电荷基团形成静电结合，且不影响其生物特性[1]。胶体金具有胶体的多种特性，特别是对电解质的敏感性，胶体金标记技术实质上就是蛋白质分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程，吸附机理是利用胶体金颗粒表面带负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合[2]。在胶体金的制备过程中，所使用的玻璃容器需要绝对清洁，否则污染物会干扰胶体金的生成，产生凝集颗粒，还原剂的用量和强弱可以决定胶体金的大小，一般为5～150 nm，还原剂量越大，所制备的胶体金颗粒越小[3]。
本研究选用的是将抗-DNA多克隆抗体标记到直径为35 nm的胶体金颗粒上，制备而成免疫胶体金（immune coLLoidaL-goLd）。利用免疫胶体金的生物化学特性，吸附反应体系中的DNA，通过离心将其分离，并经过洗涤再离心，沉淀可直接用于PCR反应。
1 材料与方法
1.1 试剂及其来源
10 ng/uL DNA标准品：本实验室。抗-DNA多克隆抗体免疫胶体金冻干粉剂：北京博奥森生物技术有限公司。灭菌纯水：屈臣氏。PCR反应试剂：PowerPLex21试剂盒，Promega公司。电泳试剂：Hi-DiTM甲酰胺（AB公司）;PPLex21 ALLeLic Ladder（Promega公司）;CC5 ILS500（Promega公司）。
<...|
== 试读已结束，如需继续阅读敬请充值会员 ==
|
|
本站文章均为原创投稿，仅供下载参考，付费用户可查看完整且有格式内容！
(费用标准：38元/2月，98元/2年，微信支付秒开通！) |
| 升级为会员即可查阅全文 。如需要查阅全文，请 免费注册 或 登录会员 |
|
