中华绒螯蟹致病性弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及其药敏特性
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摘要：【目的】明确中华绒螯蟹黑鳃病的病原菌及其药敏特性，为该病的临床诊断和防控提供科学依据。【方法】采用传统方法从患黑鳃病的中华绒螯蟹肝胰腺组织中分离病原菌，通过人工回归感染试验确定病原菌的致病性，利用API 20E细菌鉴定系统和16S rRNA序列分析对病原菌进行鉴定，并以K-B药敏纸片扩散法测定其药敏特性。【结果】从患黑鳃病的中华绒螯蟹肝胰腺中共分离获得4株疑似病原菌株（C1、C2、C3和C4），人工回归感染试验结果表明，仅C1菌株感染中华绒螯蟹后出现死亡，死亡率达90%，且试验中华绒螯蟹出现黑鳃、肝胰腺呈浅黄色的病症，与自然发病的症状基本一致。依据C1菌株的生理生化特性及16S rRNA序列分析结果，可确定C1菌株为弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii），其对健康中华绒螯蟹的半数致死剂量（LD50）为2.85×105 CFU/mL。药敏试验结果表明，C1菌株对新霉素、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、多西环素、四环素、复方新诺明、氧氟沙星和恩诺沙星等9种抗生素高度敏感，对多粘菌素B中度敏感，对氨苄西林、羧苄青霉素和万古霉素3种抗生素已产生耐药性（不敏感）。【结论】弗氏柠檬酸杆菌感染可引起中华绒螯蟹黑鳃病，且对中华绒螯蟹具有较强毒力，实际养殖生产中可选用新霉素、多西环素等渔用抗生素进行防治。
关键词： 中华绒螯蟹;黑鳃病;弗氏柠檬酸杆菌;分离鉴定;药敏特性
0 引言
【研究意义】中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）俗称河蟹、大闸蟹，广泛分布在我国沿海和湖泊地区，是江苏、安徽、湖北、浙江和辽宁等地区的重要特种水产养殖品种（付龙龙等，2017）。近年来，随着中华绒螯蟹市场需求量的不断增加，其养殖业迅猛发展，年产量已超过81万t（农业部渔业渔政管理局，2017）。但随着中华绒螯蟹养殖密度及规模的不断扩大，加上杀虫剂和除藻剂的大量使用，导致其养殖环境恶化，各种病害频发，尤其是弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）引起的细菌性病害给中华绒螯蟹养殖造成巨大经济损失（唐玉华和胡宾，2015）。因此，加快中华绒螯蟹源弗氏柠檬酸杆菌的鉴定及药敏特性检测，对确保中华绒螯蟹养殖业的持续健康发展具有重要意义。【前人研究进展】弗氏柠檬酸杆菌隶属于肠杆菌科（Enterobacteriacea...
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