优化RT—PCR检测试剂在流感病毒检测中的应用评价
[摘要] 目的 探讨优化的逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测试剂在流感病毒检测中的应用。 方法 选取乙型流感病毒Yamagata系细胞毒株1株对其倍比稀释，取高、中、低三个稀释浓度提取流感病毒核酸作为模板，采用具有高扩增效率的SpeedStar HS DNA聚合酶和HiScript Ⅱ Reverse Transcriptase逆转录酶进行PCR反应体系优化，并用优化试剂对三个浓度的流感病毒模板进行批间和批内重复性试验，与常规试剂TaKara One Step PrimeScript RT-PCR Kit反应试剂盒进行对比研究。 结果 优化试剂的PCR反应体系整个扩增反应时间从96 min缩短至55 min；通过Ct值比较，中、低浓度条件下的扩增效率与常规TAKARA试剂比较差异有统计学意义（P<0.05）；组间比较，差异有统计学意义（P<0.05）；该试剂的组内试验和组间试验的变异系数均小于2%，显示其具有良好的可重复性。优化试剂比TAKARA公司One Step PrimeScript RT-PCR Kit成品试剂盒节约1/4的成本，有一定的经济效益。 结论 优化的RT-PCR反应试剂，缩短了PCR反应时间，具有良好的稳定性和重复性，同时节约了试剂检测成本，有一定的经济效益和社会推广价值。
[关键词] 乙型流感病毒；逆转录聚合酶链反应；核酸；优化
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）21-0099-04
Application evaluation on optimized RT-PCR detection reagent in influenza virus detection
GAO Lei YAN Yong JI Jimei WANG Henghui GE Zhijian
Department of Clinical Laboratory， Jiaxing Center for Disease Control and Prevention in Zhejiang Province， Jiaxing 314050， China
[Abstract] Objective To discuss the application of optimized RT-PCR detection reagent in influenza virus detection. Methods One strain of influenza B virus Yamagata was selected and multiply diluted. Three concentrations （high， middle， and low） were selected and viral nucleic acid was extracted as templates. The PCR system was optimized by SpeedStar HS DNA polymeras and HiScript Ⅱ Reverse Transcriptase with high amplification efficiency. Intra-batch and inter-batch repetitive tests were conducte...
|
== 试读已结束，如需继续阅读敬请充值会员 ==
|
|
本站文章均为原创投稿，仅供下载参考，付费用户可查看完整且有格式内容！
(费用标准：38元/2月，98元/2年，微信支付秒开通！) |
| 升级为会员即可查阅全文 。如需要查阅全文，请 免费注册 或 登录会员 |
|
