鸡β,—防御素7的克隆与表达
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摘要：防御素在抗生素取代方面有良好的发展前景，但目前在防御素大规模表达方面仍有难点。本实验着重探究如何实现防御素的大规模表达。实验通过设计目的基因引物、PCR扩增目的基因、将鸡8防御素7（AvBD7）基因克隆到大肠杆菌BL21表达载体质粒pET32a中、扩增大肠杆菌、对鸡AvBD7基因进行鉴定、分离纯化目的蛋白并进行检测的过程方法，完成重组鸡AvBD7基因的克隆与表达，得到鸡AvBD7基因可以在大肠杆菌BL21中表达的结论，为鸡AvBD7基因的进一步临床应用打下基础。
关键词：β-防御素；原核表达；蛋白质诱导表达；蛋白质检测
中图分类号：S8 31.2
文献标识码：A
文章编号：2095-9737（2018）06-0001-04
防御素是一种具有广谱高效的抗微生物活性[1]和非特异性细胞毒作用及调节体内适应性免疫的阳离子活性肽[2]，具有独特的抗菌机理。早在1965年由Hrish等首次从兔的PMN中提取出1种具有杀菌活性的阳离子蛋白，称为'吞噬素“，之后Zeya和Spitznageleta发现此阳离子活性蛋白富含精氨酸和半胱氨酸，并将其命名为'溶酶体阳离子蛋白“[3]。20世纪80年代，Ganz等由于其广谱的抗微生物活性首次将其命名为'防御素“，且Evans首次从鸡的异嗜性白细胞中分别纯化得到Ga-ll～2[4]，之后国际统一将防御素命名为AvBD。8防御素最先从牛的支气管黏膜上皮细胞中分离得到，鸡中的防御素均为β-防御素，β-防御素7主要分布于鸡的骨髓[5-6]。
防御素相对分子质量较小，热稳定性和水溶性均较好，可以在腸道内吸收，且防御素属于多肽成分，在体内容易被蛋白酶降解为氨基酸，动物采食后在体内一般无残留，故在畜牧业中有良好的应用前景。但防御素在鸡体内含量较低，对其进行提取纯化不仅在技术上有一定的难度，而且若想获得大量的目的蛋白，需要投入大量的人力物力。通过基因工程可实现防御素的大量表达，使其成为一种不易使病原微生物产生耐药性的、具有良好前景的'抗生素替代品“[7-8]，减少抗生素广泛运用带来的危害。基于鸡β-防御素1”6的研究基础，本实验选用遗传背景清楚、生长繁殖快、转化效率高、成本低廉的大肠杆菌表达系统对鸡AvBD7基因进行初步研究，完成鸡AvBD7基因的克隆与表达。
1 材料与方法
1.1 试...
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