MTT法与CCK—8法检测兔视网膜色素上皮细胞活性的比较研究
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【摘要】目的：探讨MTT法和CCK-8法对细胞活性检测的最佳实验条件，并比较二者的优缺点。方法：取传至第5代的兔视网膜色素上皮细胞为研究对象，分别用MTT试剂和CCK-8试剂检测兔视网膜色素上皮细胞的增殖情况。结果：MTT法最佳检测波长为570nm，最佳检测时间在加入试剂后4h，细胞数量在125×103～2×104之间检测较好；CCK-8法最佳检测波长在450nm，最佳检测时间在加入试剂4～6h，适宜的细胞检测范围为125×103～1×104。结论：MTT法较CCK-8法细胞检测范围更广，孵育时间更短，是一种优于CCK-8法的细胞活性检测方法。
【关键词】MTT；CCK-8；兔视网膜色素上皮细胞；细胞活性
【中图分类号】R-332【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）06-0031-04
检测细胞活性与增殖的方法有很多，如乳酸脱氢酶释放法、台盼蓝拒染法、集落形成法、流式细胞仪法、荧光染色法、MTT比色法等，其中，MTT比色法自1983年Mosmann建立以来，由于其简便、快速、经济等优点，现已广泛用于细胞实验，成为定量检测细胞生长和增殖的理想方法[1]。但由于MTT生成的产物Formazan为非水溶性的，需要有机溶剂（DMSO、异丁醇等）才能溶解，且在吸出培养液时可能会因操作不当，丢失部分Formazan，导致结果可重复性差。针对MTT法的不足，研究发现了很多水溶性的四氮唑蓝类：如XTT法[2]、MTS法[3]、Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）法[4]等。本文以兔视网膜色素上皮细胞为研究对象，探讨MTT法和CCK-8法对细胞活性检测的最佳实验条件，并对二者的优缺点做一比较。
1仪器与材料
11仪器E680酶联免疫检测仪（BIO-RAD公司）。
12[JP3]材料MTT试剂（南京凯基批号：2016114）；CCK-8试剂（日本同仁化学，货号：CK04）；DMSO（Aladdin，CAs Number：67-68-5）；第5代兔视网膜色素上皮细胞。[JP]
2方法
21最佳检测波长和最佳孵育时间的确定取对数生长期的兔视网膜色素上皮细胞，025%胰蛋白酶消化约3min，计数，以每孔细胞密度5×103个，接种于96孔板内，每孔100μL的细胞悬液，每组设4个复孔，96孔板四周用PBS填充，以避免孔内液体蒸发，放入37℃培养箱培养24h使细胞贴壁。CCK-8组每孔加入10μL CCK-8试剂，放入培养箱孵育1、2、3...
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