多黏芽孢杆菌HD—1产β—甘露聚糖酶的条件优化
摘要：采用DNS比色法，通过单因素试验和正交试验对多黏芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）HD-1产β-甘露聚糖酶的培养基主要成分和培养条件进行优化。结果表明，该菌种产β-甘露聚糖酶的最适培养基为魔芋粉0.75%、酵母膏1.00%、磷酸二氢钾0.04%、硫酸镁0.05%，培养基初始pH 9.0；最适培养条件为接种量6%，培养温度31 ℃，培养时间27 h。在此优化条件下，多黏芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶活性可达72.6 U/mL。
关键词：多黏芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）；β-甘露聚糖酶；发酵条件；优化
中图分类号：Q939.97 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）01-0164-04
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.01.042
β-甘露聚糖酶是一种半纤维素水解酶，降解产物的非还原末端为甘露糖，其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及β-甘露聚糖等[1-3]。β-甘露聚糖酶可以用于饲料工业，能消除甘露聚糖对单胃动物各种营养素的抗营养作用[4-6]，还可用于糖链结构的分析、造纸业、纺织业、石油业等。微生物是产生β-甘露聚糖酶的主要来源，且具有活力高、成本低、来源稳定、提取方便等明显优点[7，8]。本试验以多黏芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）为生产菌株，通过单因素试验和正交试验[9，10]对多黏芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的培养基成分和培养条件进行优化，以提高其产酶活力，为后续的开发利用奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种 多黏芽孢杆菌突变菌株HD-1，由武汉生物工程学院发酵工程实验室保藏。
1.1.2 培养基 斜面活化培养基：3 g/L牛肉膏、10 g/L蛋白胨、5 g/L氯化钠、20 g/L琼脂，pH 7.4；液体种子培养基：5 g/L魔芋粉、10 g/L酵母膏、1g/L硫酸镁、0.5 g/L磷酸二氢钾、1 g/L硫酸铵，pH 7.5；基础产酶培养基：5 g/L魔芋粉、10 g/L蛋白胨、0.2 g/L磷酸二氫钾、0.5 g/L硫酸镁，pH 8.0。
1.2 方法
1.2.1 粗酶液的制备 将保存的多黏芽孢杆菌HD-1接种于斜面活化培养基上，35 ℃活化培养24 h。取一环活化后的菌种HD-1，接入装有50 mL液体种子培养基的250 mL三角瓶中，200 r/min、35 ℃恒温培养24 h。以4 %接种量将液体种子接入盛有50 mL基础产酶培养基的250 mL三角瓶中，200 r/min、35 ℃恒温摇床振荡培养24 h。将培养了24 h的发酵液5 000 r/min冷冻离心5 min，取上清液即为粗酶液，4 ℃保存备用。
1.2.2...
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