禽流感病毒检测方法研究进展
摘要：禽流感不仅对世界养禽业带来巨大的经济损失，而且可以感染人，公共卫生意义重大。由于其病毒亚型众多，抗原性变异极快，毒株的致病性也相差很大，早期快速诊断和血清学检测就成为预防和控制禽流感的前提条件。目前，分子生物学检测方法在AIV病原学检测及诊断方面有着较大优势，可以对其进行快速、准确的检测。
关键词：禽流感病毒；LAMP技术；NASBA技术聚合酶链式反应；基因芯片技术；核酸探针技术
禽流感（Avian Influenza，AI）是由A型流感病毒（AvianInfluenza Virus，AIV）引起的一种以禽类呼吸系统及全身性败血症为特征的禽类疾病综合征。自禽流感被发现100多年来，人类并没有掌握有效的预防和治疗该病的方法，一旦爆发疫情，仅仅依靠消毒、隔离、大量宰杀等方法防止其蔓延，经济损失巨大。能否及时发现该病的发生，尽快的做出应对措施是降低经济损失的途径之一，因此，对其进行快速、准确的检测就显得至关重要。
目前AIV分子生物学检测方法主要有环介导恒等温扩增技术、快速等温扩增NASBA技术、聚合酶链式反应、基因芯片和核酸探针等技术手段，现简要概述如下：
1、LAMP技术
2000年Notomi等建立了环介导恒等温扩增（100p-mediatedisothermal amp lification，LAMP）技术，这是一种新型的核酸扩增技术。该方法应用广泛，适用于基层实验室进行快速检测。2008年，侯佳蕾等根据H5亚型AIVHA基因序列，设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增引物，并以此套引物建立了一种基于LAMP技术的H5亚型禽流感病毒诊断方法，结果表明，该方法对H5亚型AIV RNA的最小检测限为10-6，灵敏度高于RT-PCR方法，全部反应可在1.5h内完成。在反应体系中添加SYBR GREEN Ⅰ染料后，可通过肉眼观察有无荧光，直接判定结果。
2、NASBA技术
NASBA（nucleic acidsequence””basedamplification）技术是一项以RNA为模板的快速等温扩增技术，该技术特别适用于RNA分子的检测。Collins研究小组于2002年首次发表了关于应用NASBA技术检测禽流感病毒的论文，目前已成功开发出可检测禽流感群特异性、H5亚型、H7亚型的NASBA/ECLipse检测试剂盒。2005年，单松华等也建立了NASBA技术进行H5亚型的禽流感检测。该技术的特点是整个扩增过程在恒温条件下进行，因此不需要特殊的控温装置，大大避免了PCR扩增过程中复杂的温度变化，不仅能检测出具有感染性的完整的病毒颗粒，还能检出非感染性的以及错...
|
== 试读已结束，如需继续阅读敬请充值会员 ==
|
|
本站文章均为原创投稿，仅供下载参考，付费用户可查看完整且有格式内容！
(费用标准：38元/2月，98元/2年，微信支付秒开通！) |
| 升级为会员即可查阅全文 。如需要查阅全文，请 免费注册 或 登录会员 |
|
