抗虫基因Cry1C转化大豆的研究
摘要 [目的] 将对鳞翅目害虫具有抗性的抗虫基因Cry1C转入大豆中，获得对田间鳞翅目害虫具有抗性的大豆材料。[方法]利用农杆菌介导法将抗虫基因Cry1C转入大豆品种Williams82中，并通过Bar试纸条及PCR方法对所获得的转化苗进行鉴定。[结果]获得28 株阳性大豆转化植株。[结论]初步认定Cry1C基因已整合到大豆基因组中。
关键词 大豆；Cry1C基因；农杆菌介导；抗虫
中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）35-12461-03
随着转基因技术的发展，基因工程已成为大豆分子育种和基因功能研究的重要手段。目前，大豆遗传转化的主要方法有农杆菌介导法、基因枪法、PEG法、花粉管通道法等[1]。其中，农杆菌介导的子叶节转化法具有外植体获得不受时间限制、试验操作简单、生长周期短等特点，成为目前应用最为广泛的转化方法[2]。
苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis， 以下简称 Bt）为革兰氏阳性菌，是一类对害虫毒力强、致死速度快且对害虫天敌无毒性的昆虫病原微生物，因其在菌体的稳定生长期可形成伴胞晶体蛋白（parasporalcrystalprotein），故又被称为杀虫晶体蛋白，该蛋白产物能够在昆虫的中肠内降解成毒性小肽，从而特异性毒杀昆虫[3]。其中Cry1C基因能够在抑制杀死鳞翅目害虫方面具有高活性[4]，其功能在Cry1C基因转化水稻的研究中得到证实，所获得的阳性植株能够有效杀死鳞翅目害虫[5]。田间害虫在很大程度上影响大豆的产量和品质，其中鳞翅目害虫是重要虫害之一。为了提高大豆对田间鳞翅目害虫的抗性，笔者将经过人工改造的Cry1C基因导入大豆品种Williams82中，以期获得对大豆食心虫、斜纹夜蛾等鳞翅目害虫具有较高抗性的大豆新材料。
1 材料与方法
1.1 试验材料
大豆品种Williams82由中国农业科学院作物科学研究所提供；农杆菌菌株EHA105由吉林省农业科学院农业生物技术研究所保存。
1.2 植物表达载体
试验载体为pCAMBIA3300，该载体启动子为35S，筛选标记基因为Bar，利用SacⅠ和SmaⅠ双酶切，将Cry1C基因连接到pCAMBIA3300载体上，获得植物表达载体pCAMBIA3300-Cry1C。结构简图见图1。
1.3 农杆菌介导大豆转化
1.3.1 侵染液制备。利用含利福平（rif）25 mg/ml、卡那霉素（kan）50 mg/ml的YEP液体培养基对菌液进行悬浮培养，在菌液浓度为OD600≈0.8时，3 000 r/min离心10 min，弃上清，用液体共培养培养基（CCM液）将菌体重悬...
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