诱变育种推理选育类球红细菌CoQ10高产菌株正突变库的研究
摘 要：以类球红细菌NM-FZ-47为出发菌株，采用紫外线和NTG2种诱变，利用叠氮钠、对羟基苯甲酸、罗红霉素及卡那霉素等抗性筛选因子，实现快速推理选育辅酶Q10高产菌株，成功构建了2个正突变库，并从库中筛选出产量提高15%以上的6株辅酶Q10突变株UV-LH-37、UV-NaN3-44、NTG-LH-28、NTG-NaN3-17、NTG-PHB-54、NTG-LN-67，作为进一步基因组改组育种的出发菌株。
关键词：诱变育种；推理选育；正突变库
中图分类号 S182 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）10-0018-03
辅酶Q10（CoQ10）又称为泛醌，作为一种重要生物活性物质，具备丰富生理功能，近年来随着人们保健意识提高，需求量不断增加[1-2]。CoQ10的生产方法一般分为直接提取法、化学合成法、微生物发酵法等[3]。微生物发酵法具有原料便宜、易分离、产物天然、无手性问题、易被人体吸收等优势，同时容易实现工业化生产，成为最有发展潜力的CoQ10生产方法。类球红细菌（Rhodobacter phaeroides）是最重要的辅酶Q10产生菌[4]，菌株的生产性能是影响发酵法生产辅酶Q10成本重要因素，本研究拟通过紫外线与NTG诱变育种的手段，结合抗性因子推理育种手段，实现快速选育高产菌株的目标，分别构建紫外线与NTG诱变正突变库，为进一步基因组改组育种奠定基础。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌种 类球红类球NM-FZ-47为本实验室保藏菌株
1.2 实验方法
1.2.1 培养方法 从斜面挑取一环，进行平板划线培养（32℃、7d）；挑取平板单菌落接入种子培养基（装液量25mL/250mL三角瓶）培养（32℃、220rpm、24h），制成液体种子；接种量为20%（V/V），液体种接入发酵培养基（装液量50mL/250mL三角瓶）培养（32℃、220rpm、24h）。
1.2.2 CoQ10的检测 采用HPLC法检测CoQ10的浓度[5]。
1.2.3 紫外诱变和NTG诱变正突变库构建
1.2.3.1 紫外诱变正突变库构建 菌悬液（细胞浓度为106个/mL），经紫外线照射一定时间，然后冰浴稳定5min，在红灯下稀释涂布，32℃培养7d后，挑选突变菌落，进一步定向初筛、复筛，构建紫外线诱变正突变库。
1.2.3.2 NTG诱变剂正突变库构建 菌悬液（细胞浓度为106个/mL），经一定工作浓度NTG振荡处理18min后，稀释涂布，32℃培养7d后，挑选突变菌落，进一步定向初筛、复筛，构建NTG诱变正突变库。
1.2.4 抗性因子快速推理选育CoQ10正突变株 将紫外和NTG诱变获得突变菌落，通...
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