武汉市市售淡水小龙虾中副溶血性弧菌的分离鉴定及多位点序列分型
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摘要：采集武汉市各大农贸市场52份小龙虾（即克氏原螯虾，Procambarus clarkii）样品，利用1%氯化钠碱性蛋白胨水（APW）和TCBS对小龙虾样品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）进行分离和初步鉴定，用PCR扩增副溶血性弧菌具有种特异性的tl基因来验证疑似菌株。PCR检测方法共检出14株副溶血性弧菌，检出率为26.92%。在小龙虾中分离得到的14株副溶血性弧菌，对其进行基于dnaE-gyrB-recA-dtdS-pntA-pyrC-tnaA的多位点序列分型。其中dtdS的多态性位点比例均高于其他6个基因，为5.2%。7个基因串联后将14株副溶血性弧菌分为12个序列型，其中7株序列型未知，分辨力达0.967。可知武汉市市售淡水小龙虾中副溶血性弧菌呈现出较大的多样性。Neighbor-joining系统进化树将分离得到的14株副溶血性弧菌分为2个群，VP2、VP13、VP7和VP14同属一个群，其他10株则属于另外一个群。其中VP13和已知的临床分离株ST3在进化树上表现出较高的亲缘性（69%）。
关键词：副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）；小龙虾（Procambarus clarkii）；多位点序列分型；系统进化树
中图分类号：S852.61；S966.12 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）18-4548-04
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.18.039
湖北省水产品产值约占到农业的20%，淡水产品总产量连续16年在中国排名第一。其中，淡水小龙虾出口一直是中国出口最多的省份，约占中国出口总量的50.6%[1]。小龙虾学名克氏原螯虾（Procambarus clarkii）[2]，也叫淡水小龙虾。小龙虾的养殖主要分布于池塘、沟渠等地区，受生长环境的影响，虾体内可能寄生多种病原微生物，易通过交叉污染其他农产品，对消费者健康造成威胁。而且在出口方面，淡水产品常因微生物超标导致淡水产品不合格而影响了产品的对外信誉，严重阻碍了湖北省整个水产产业链的健康发展。
副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）是革兰氏阴性嗜盐菌，隶属弧菌科弧菌属，它是一种典型的人兽共患病菌，也是一种常见的引起食物中毒的病原菌[3]。据世界卫生组织报道，自1997年以来，副溶血弧菌病的发生呈持续上升趋势。1992～2001年国家食源性疾病监测网数据显示，发生的微生物食源性疾病中由副...
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