核桃叶部内生真菌发酵产物抑菌活性及GC—MS分析
摘要：以核桃叶部分离获得的20株内生真菌为研究对象，采用抑制菌丝生长速率法测定发酵产物对8种常见植物病原真菌的抑菌效果，并对活性菌株发酵产物的乙酸乙酯萃取相进行气质联用分析（GC-MS）鉴定主要化学成分，用面积归一化法计算各成分相对含量。结果表明：15株核桃叶部内生真菌的发酵滤液对8种供试病原菌均有一定抑制作用，占内生真菌总数的75.0%。其中黑孢霉属（Nigrospora）Y4菌株对8种病原菌的抑制作用最强，抑制率均大于60%，抑菌谱广泛。Y4菌株对番茄灰霉病菌的抑制作用最大，抑制率达95.95%，其次是苹果果腐病菌（84.81%）。Y4菌株发酵产物乙酸乙酯萃取相Fr4组分经GC-MS分析共鉴定出14种化合物，占出峰物质总量的89.58%。其中哌草丹相对含量最高，达到50.46%，其他物质主要是有机酸类化合物。由此可知，核桃内生真菌具有广泛的抑菌谱，活性菌株Y4发酵产物可望研发出新型微生物源除草剂。
关键词：核桃；内生真菌；抑菌活性；气质联用；微生物源除草剂
中图分类号：O657.63 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）10-0292-03
收稿日期：2013-12-25
基金项目：国家自然科学基金（编号：30972315）。
作者简介：李丽（1986”），女，山东临沂人，硕士，从事树木提取物化学与工程方向的研究。E-mail：zyqlili@163.com。
通信作者：翟梅枝，博士，教授，硕士生导师，主要从事植物资源利用与植物病害防治的研究。E-mail：plum-zhai@163.com。植物内生真菌是指那些生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物各种组织和器官内部或细胞间隙，没有引起宿主明显病害症状的真菌[1]。近期研究发现，植物内生真菌代谢产物具有抗肿瘤[2-4]、抑菌[5-6]、抗氧化[7]等活性。1993年Stierle等从太平洋红豆杉树皮中分离得到具有抗肿瘤活性的紫杉醇内生真菌[8]，这一发现使利用内生真菌生产药物活性化合物成为国内外研究的新热点[9]。
核桃（Juglans regia L.）是核桃属植物中分布最广、经济价值最高的栽培种。核桃属植物次生物质具有抑菌、抗肿瘤、抗氧化、化感、杀虫等多种生物活性[10-11]。由于植物内生真菌可产生与宿主植物相同或相似的生物活性物质，本研究对从健康核桃叶部分离得到的20株内生真菌进行抑菌活性筛选，并对活性菌株发酵产物的有效成分进行初步研究，以期为进一步开发核桃内生真菌发酵产物作为微生物源农药提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试内生真菌2...
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