RUVBL2基因knock—down对Rad51和γ—H2AXfoci的影响
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摘 要：用脂质体转染的方法将特定的RUVBL2 siRNA序列转染到真核细胞，并鉴定其在人肺纤维细胞（MRC5 SV）中的表达，以确保RUVBL2基因的knock-down效果。用Rad51和γ-H2AX的特异性抗体进行免疫荧光染色，应用荧光显微镜观察计数Rad51和γ-H2AX foci的数量。Western blot法证实了siRNA以及转染的效率，确定了RUVBL2基因的存在有利于诱导DNA双链断裂（DSB）条件下Rad51和γ-H2AX被招募到DNA损伤位点。
关键词：RUVBL2 siRNA RAD51 γ-H2AX foci
中图分类号：R113 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2017）01（b）-0200-03
在细胞生命活动过程中，基因组DNA常会受到内源和外源因子的攻击而发生不同类型的损伤。其中，对细胞最具伤害性的损伤是DNA双链断裂（double-strand break， DSB）。大分子蛋白复合体INO80就直接参与了DSB修复过程[1]。RUVBL蛋白是INO80复合体的一类重要亚基。RUVBL1（RuvB-like 1）和RUVBL2（RuvB-like 2）同属于ATPases（AAA+ ATPase）家族成員，是细菌DNA 解旋酶RuvB蛋白在哺乳动物中的同源蛋白[2]。
同源重组是DSB修复的一种重要修复方式，RAD51是一种重要的重组蛋白，主要寻找同源DNA的模板并且帮助在损伤DNA与未损伤DNA修复模板之间产生联系[3]。在酵母中，INO80复合体在染色体修饰和染色体重组过程中会将RAD51蛋白招募到DNA损伤位点[4]，而在哺乳动物细胞里INO80复合体也会在染色体修饰和染色体重组过程中将RAD51招募到了DNA损伤位点[5]。哺乳动物INO80复合体通过DNA末端切除的作用介导了DSB的修复[6]。RUVBL蛋白的缺失会影响RAD51被招募到DNA双链断裂位点，从而影响到后续进行的DNA末端切除修复[7]。小鼠和人体细胞内，在含有RUVBL蛋白的TIP60复合体缺失或者活性降低的情况下，RAD51被招募至DNA双链断裂损伤位点的进程也会被削弱[8]。也就是说RUVBL蛋白在DNA损伤修复过程，尤其是末端切除修复中有着不可替代的作用。细胞在电离辐射等因素作用下直接诱导形成的DSB可诱导H2AX磷酸化成γ-H2AX，γ-H2AX是DNA 双链断裂的一个标志[9]。细胞在受到DNA损伤后，尤其是DNA双链断裂后，在断裂位点会出现由γ-H2AX形成的焦点。γ-H2AX对于其他蛋白募集到焦点起着非常关键的作用[10]...
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