鸡传染性支气管炎病毒Real-Time,PCR检测方法的建立
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摘 要：本试验针对肾型鸡传染性支气管炎病毒（IBV-QX）保守基因N基因设计并合成引物，构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-QX SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR标准曲线。结果显示，本次所建立的检测方法重复性好，特异性高，最低可检测到39.7copies/μl的病毒核酸，对常见禽源病毒无交叉反应。本次建立的方法不仅可以用于各基因型IBV病原检测，也可用于病毒的定量研究。因此，本实验室所建立的IBV检测方法在鸡传染性支气管炎病毒的快速检测上具有重要意义。
关键词：鸡传染性支气管炎病毒;Real-Time PCR;病毒检测;荧光定量
中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2019）2-0020-04
传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的高度接触传染性疾病，IBV属冠状病毒科冠状病毒属。IBV感染主要引起鸡的呼吸道、肾脏和生殖道病理变化，导致被感染鸡群发病而造成巨大经济损失[1]。IBV的不同血清型之间几乎没有交叉保护，不断出现新的IBV血清型是预防和控制IB的主要挑战[2]。调查显示，QX基因型IBV是我国近几年主要流行的毒株之一[3]，常规RT-PCR方法以其简单、快捷的特点被各实验室用作IBV的实验室诊断方法，但该方法不能用于IBV的定量检测，并且对病毒含量很低的病料也不能够很好地检出。为此，建立一种特异性高、重复性好、敏感性高的IBV实验室检测方法将有助于鸡传染性支气管炎疫情的防控，从而将损失将至最低。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 病毒株 IBV-QX毒株由山東省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室惠赠。
1.1.2 试验动物 9日龄 SPF鸡胚购自山东昊泰实验动物繁育有限公司，用于病毒复苏。
1.1.3 试验试剂与主要试验仪器 琼脂糖DNA凝胶回收试剂盒、体液病毒DNA/RNA提取试剂盒购自康宁生命科学（吴江）有限公司;荧光定量试剂盒、反转录体系试剂购自山东赛恩斯科技有限公司;DL-2000Marker、2xTaq PCR Star Mix、感受态细胞、pMD18-T载体、质粒小提试剂盒均购自北京全式金生物技术有限公司。PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪均购自杭州博日科技有限公司;Real-Time PC...
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