上转发光技术及其在食品中病原微生物检测的应用

近年来，由食源性致病菌引发的食物中毒不断发生，1996年日本发生了世界上规模最大的历时3个月、波及40多个都府县、涉及上万人的大肠杆菌O157食物中毒事件；2001年因发生'疯牛病“导致德国卫生部部长和农业部部长辞职；2005年遍及整个东南亚的禽流感更为各国的食品安全部门敲响警钟；2011美国23个州爆发了活禽引发的沙门氏菌疫情，造成将近100人感染；我国也爆发过多起由食源性致病菌引起的食物中毒事件，其中1999年爆发的大肠杆菌O157：H7中毒事件，中毒人数达2万，其中死亡177人，给我国经济造成了巨大损失。

食品安全已成为世界各国共同面临和关注的问题，由病原微生物引起的食源性疾病是影响食品安全最主要的因素之一。快速而准确地检测出被称为'头号杀手“的食品致病菌，是确保食品安全的首要任务，因此建立一种快速、准确、便捷的检测技术，对于从源头制止食源性致病菌污染，预防中毒事件的发生具有重要意义。食源性致病菌的传统检测方法主要有微生物培养法、电阻电导测定法、细菌直接计数法、分子生物学法、免疫学方法等。但传统微生物检验方法，不仅步骤复杂，而且耗时费力、灵敏度也不高，难以吸水纸上，拍干；

g.立即在每孔中加入底物混合液，盖好盖板膜，轻轻振荡混匀，室温下避光反应；

h.揭开盖板膜，在每孔中加入终止液，轻轻振荡混匀；

i.终止后5min内用酶标仪取吸光度值。

该试剂盒灵敏度0.04ppb，原奶样本检测限为0.1ppb，奶粉检测限为0.5ppb，样品回收率范围90%±30%。

黄曲霉毒素M1快速检测试纸条

试纸条将特异性的抗原以条带状固定在膜上，金标抗体吸附在微孔中，待检样本溶解微孔的金标抗体后通过毛细作用向前移动至固定抗原区域时，待检物与金标抗体的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。

设备：温育器；微量移液器。

检测步骤：

a.将待检奶样和产品组分恢复至室温；

b.打开铝箔袋，取所需量金标微孔和试纸条；

c.待检奶样充分摇匀后加入金标微孔中，置于50℃温育器中温育；

d.将试纸条插入金标微孔中反应；

e.从金标微孔中取出试纸条，去试纸条下端的样品垫，判定结果。

结果判定：

阴性：T线比C线颜色深或者一致，检测结果为阴性。

阳性：T线比C线颜色浅或者没有颜色，检测结果为阳性。

无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸条均判为无效。

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