多重荧光定量PCR测定登革热Ⅰ~Ⅳ型方法的建立与初步评价
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[摘要] 目的 探討多重荧光定量PCR测定登革热Ⅰ～Ⅳ型方法的建立与初步评价。 方法 针对登革热Ⅰ～Ⅳ型使用自建的引物探针对反应条件及温度进行调整，且对阳性样本进行不同浓度的稀释，检测自建多重荧光定量PCR在登革热Ⅰ～Ⅳ型测定中的重复性、灵敏性及特异性。 结果 6份登革热阳性样本通过自建的检测方法来进行检测，全部能够显示明显的S曲线扩增，且与原有确证方法相比，不同型别的结果一致。其他10份病毒阳性样本及阴性样本全部没有显示扩增曲线，提示自建的检测方法特异性良好。分别检测登革热Ⅰ～Ⅳ型，变异系数（CV%）值水平范围：0.51～5.51，提示重复性较好。使用自建的多重荧光定量PCR对登革热不同型别进行检测的平均用时与ELISA法相比无显著差异（t=1.561，P>0.05）。通过自建的多重荧光定量PCR测定通过仪器来完成核酸的自动提取，在仪器当中加样、上机之后不需要另外的操作，充分降低了发生污染的风险。 结论 本次研究设计建立的登革热Ⅰ～Ⅳ型多重荧光定量PCR检测方法，在重复性、灵敏性及特异性方面均较为理想;且相比ELISA法在加样后无需另外手动操作，更加简易方便。
[关键词] 登革热;荧光定量PCR;血清型;病毒载量
[中图分类号] R512.8 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2019）34-0008-06
Establishment and preliminary evaluation of multiplex quantitative PCR for determination of dengue fever type Ⅰ-Ⅳ
FEI Yunxia1 ZHANG Xiangbo2 HE Tao2 ZHANG Yuting1 GAO Yidan3 GAO Ling3 WANG Jie3
CHEN Gongying3
1.Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou 310053， China; 2.Hangzhou Normal University， Hangzhou 310053， China; 3.Department of Infectious Diseases and Liver Diseases， Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University， Hangzhou 310053， China
[Abstract] Objective To establish and evaluate the method of multiplex quantitative PCR for the determination of dengue ...
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