杂色曲霉素双抗夹心ELISA检测方法的建立
摘要：杂色曲霉素在自然界广泛存在，毒性强，可经过多种途径吸收，诱发人和动物产生肿瘤，从而造成极大危害，研究发现肝癌、胃癌高发区的粮食中杂色曲霉素的检出量及检出率明显高于上述肿瘤低发区。本研究旨在寻找快速简单的方法检测谷物饲料中的杂色曲霉素，通过传统小鼠单克隆抗体和噬菌体库抗体的制备，建立检测谷物中杂色曲霉素的酶联免疫吸附测定方法enzyme link immuno sorbent assays（ELISA）。
关键词：杂色曲霉素；酶联免疫吸附试验
基金项目：浙江省台州市科技项目'谷物霉菌毒素的ELISA检测技术研究及试剂盒开发应用“（20111ZD05）
中图分类号： TS210.7 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.07.031
杂色曲霉素（Sterigmatocys简称 ST）是一种杂环化合物，在自然界广泛存在，毒性强，可经过多种途径吸收，诱发人和动物产生肿瘤，从而造成极大危害。要减少其对人畜的影响，有效而快速的检测出食物及饲料中的 ST就显得非常重要。通过传统小鼠单克隆抗体和噬菌体库抗体的制备，建立检测谷物中杂色曲霉素的酶联免疫吸附测定方法enzyme link immuno sorbent assays（ELISA），有助于推动我国杂色曲霉素的监测及研究工作的开展。
1 材料
1.1试剂
抗杂色曲霉素ASH抗体（1毫克/毫升）、抗杂色曲霉素ASP1抗体（毫克/毫升）、（HRP）辣根过氧化物酶（HRP）、4-（N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺脂钠盐（sulfo-SMCC）、Sephadex G25、磷酸盐缓冲液（PBS）、BSA、ST、NaBH4。其中抗杂色曲霉素ASH抗体和抗杂色曲霉素ASP1抗体委托北京华肽先锋生物科技有限公司生产（合同号HTXF2012030201BJ），抗杂色曲霉素ASH抗体系传统小鼠单克隆抗体制备所得，抗杂色曲霉素ASP1抗体通过噬菌体库筛选得到的ScFv抗体。其余试剂均为市购。
1.2 设备
酶标分析仪 ASCENT 354型，洗板机 BIO-RAD 1575型。
2方法
2.1 抗杂色曲霉素ASP1 抗体与辣根过氧化物酶的偶联
将纯化好的ASP1抗体进行0.01M PBS透析去除所有可能的含有NH3的物质，比如TRIS碱等，3M NaOH调节pH值7左右。
按Sulfo-SMCC说明书，用纯水溶解sulfo-SMCC，ASP1抗体与Sulfo-SMCC=1∶100的比例，在搅拌下把sulfo-SMCC溶液逐滴缓慢加入ASP1 抗体溶液中，室温搅拌30分钟以上。
用平衡缓冲液平衡Sephadex G25柱30分钟，把反应好的sulfo-smcc/ASP1 抗...
|
== 试读已结束，如需继续阅读敬请充值会员 ==
|
|
本站文章均为原创投稿，仅供下载参考，付费用户可查看完整且有格式内容！
(费用标准：38元/2月，98元/2年，微信支付秒开通！) |
| 升级为会员即可查阅全文 。如需要查阅全文，请 免费注册 或 登录会员 |
|
