牛大肠杆菌病灭活疫苗的制备及小鼠攻毒试验分析
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摘要：近年来关于规模化牛场犊牛腹泻的报道日渐增多，大肠杆菌是引起犊牛腹泻最常见的病原体。本研究对发病牛分离得到的大肠杆菌菌株进行生化试验、PCR鉴定、动物致病性试验、细菌灭活、疫苗制备、小鼠免疫和攻毒保护试验。PCR结果表明大肠杆菌JS160810含有毒力基因F41、Sta、K99，大肠杆菌ZD150808含有毒力基因irp2、FyuA、Stxl，动物致病性试验结果表明都具有很强致病性。小鼠的最佳免疫剂量为1.5×1010CFU。攻毒保护结果氢氧化铝胶佐剂疫苗的保护率为80%，说明疫苗能产生良好的免疫应答。为今后进行田间试验提供了理论依据，并将为防治牛大肠杆菌病提供一种保护范围更加全面的生物制品。
关键词：多价疫苗;犊牛;腹泻;强致病性;大肠杆菌病
中图分类号：S855.1+2 文献标识码：A 文章编号：2095-9737（2018）10-0023-03
犊牛腹泻常由于肠道内的细菌、病毒等病原微生物或者营养、环境等因素所致。其中致病性大肠杆菌是犊牛腹泻发病的最主要因素之一[1-2]。导致犊牛腹泻的大肠杆菌毒力因子主要有肠毒素和菌毛黏附素等。犊牛大肠杆菌病有着较高的发病率及死亡率，而且还会继发感染其他疾病。因为大肠杆菌拥有血清型众多、细菌变异性大、抗原复杂等特点，并且不同地区流行的血清型菌株之间又存在着很大的差别[3]。抗生素在大肠杆菌病预防及治疗方面有着积极作用，但是随着抗生素的使用不当，大肠杆菌耐药谱和耐药水平不断提高，大肠杆菌多重耐药现象已十分严重。如今新型抗生素不断问世，但抗生素的研制速度远远低于耐药菌的发展速度。外界环境对细菌作出刺激后，细菌会大量产生毒力因子，这些因子的功能各不相同，在细菌致病的过程中起到重要作用。目前，国内外先后出现了很多种相应预防犊牛腹泻的试验性疫苗，其中包含以抗黏附素免疫为基础的含单价或多价黏附素抗原的灭活全菌苗、基因工程亚单位疫苗等。然而因为大肠杆菌的血清型比较多，各地分离菌株携带的毒力因子及生物学特性又有所不同，使得疫苗的应用受到很大限制，至今还没有普遍应用的预防犊牛大肠杆菌腹泻的商品化菌苗[4]。因此，按照不同地区致病性大肠杆菌的优势血清型研制出真正有效的灭活疫苗具有现實的生产意义[5]。
1 材料
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