金属硫蛋白突变体的烟草植物高效表达载体探讨
摘 要：金属硫蛋白通常由α和β两个结构域组成，其中α的结构域构成包括Cd2+和Hg2+，小鼠突变体则在大肠杆菌中进行搭建，并获得了转基因植株。为了更好地增强外源基因在烟草中的表达效果，可以在基因起始密码子ATG附近融入适合植物需要的碱基组合AACAATG，这种组合有利于将突变体基因插入具有35S强启动子的植物双元表达载体pGPTVd35S-BAR中，并获得αα突变体的植物双元表达载体。在本次研究中，将采用PCR-Southern和蛋白Dot-blotting检测方法，证明αα突变体可以在烟草中良好地表达。同时，在抗重金属的实验中证明转基因烟草能够在Cd400中良好的生长。
关键词：金属硫蛋白突变体 植物高效表达载体 烟草 转基因
中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2016）4（c）-0000-00
现阶段，我国植物基因工程技术得到了全面的发展，外源基因通过不同的方法进入植物体中。尤其是使用转入外源基因的方式能够有效地提高植物吸附重金属的能力，有利于解决环境污染问题。在工农业文明持续发展的过程中，废水、废气、废渣及农药的不合理使用对环境资源造成了严重的损害，其中重金属污染主要以Cd2+、 Hg2+、Pb2+为主。它们在食物链的循环过程中将会影响人类的生命健康。除此之外，在自然界中金属硫蛋白（MT）发挥着至关重要的作用，这也是本文探讨的主要方向。
1 金属硫蛋白的基本概念
金属硫蛋白是一类低分子量富含半胱氨酸的金属结合蛋白，可以结合排除体内过量的重金属物质。与此同时，在植物界存在一类多肽物质，即植物络合态，它是一种酶促合成的产物，在重金属大量存在的时候会有全新的表达。除此之外，植物本身对重金属的抵抗能力是有限的，需要通过植物转基因技术将金属硫蛋白基因转入植物体内。
金属硫蛋白通常由α和β两个结构域组成，其中α的结构域构成包括Cd2+和Hg2+，在构建MT重组体αα的过程中，其中β结构域被α结构域所代替，通过实验我们认为αα的稳定性与天然MT相同。因此，当我们在考虑将αα转基因放入植物体内时，可以优化植物对重金属的承受力。在该方面的研究中，我们认为重金属的含量与植物体内的αα基因的蛋白量成正相关关系，并证实了转入αα基因的烟草对Cd2+有较好的抵抗性。
2 金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的实验探究
2.1 材料与方法
本次实验我们选取了含有小鼠MT重组体的αα基因cDNA质粒pBSαα、质粒pUC18、农杆...
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