多重RT—PCR检测蝴蝶兰3种病毒CymMV、ORSV和CMV
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摘要：根据建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus，CymMV）、齿兰轮斑病毒（Odontoglossum ringspot virus，ORSV）和黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）3种病毒外壳蛋白基因序列保守序列设计特异性引物，以病毒侵染的蝴蝶兰总RNA反转录的cDNA为模板进行扩增，建立了三重RT-PCR同时检测该3种病毒的方法。CymMV、ORSV和CMV 3种病毒特异扩增的片段分别为561、433、306 bp。用该方法对17个疑似病毒感染的蝴蝶兰样品进行檢测，结果13个材料检测出CymMV特异带，2个材料检测出ORSV病毒特异带，1个材料检测出CMV病毒特异带，1个材料同时检测出CymMV和ORSV病毒2条特异带，所检测的17个蝴蝶兰材料未发现3种病毒复合侵染的情况。
关键词：蝴蝶兰；多重RT-PCR；建兰花叶病毒；齿兰轮斑病毒；黄瓜花叶病毒；检测方法
中图分类号： S436.8+1文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2017）05-0091-02
兰花是一种高价值的观赏花卉，但一旦感染病毒，其观赏价值和经济价值将受到严重影响。近年来，随着兰花国内外贸易和种质交流频率的增加，兰花病毒病的发生有蔓延趋势。目前，至少有28种病毒可感染兰科植物，其中我国兰科植物感染的病毒以建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus，CymMV）、齿兰轮斑病毒（Odontoglossum ringspot virus，ORSV）为主，且这2种病毒复合感染占多数，也有少数蝴蝶兰感染黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）[1]。CymMV和ORSV主要借助机械性伤口进行传播，CMV 可借汁液传染，也可通过蚜虫传播。这3种病毒病感染兰花后可迅速扩散，且无有效防治药剂；因此，有必要建立多种病毒的高效检测方法，尽早检出感病植株并实施销毁，避免兰园大面积受损。
目前检测植物体内病毒的主要方法有电镜法、血清学鉴定和PCR技术等。其中PCR技术，尤其是多重PCR，具有快速、便捷、灵敏度高和特异性强等显著优点，现已广泛用于病原微生物的检测。多重PCR是在同一反应体系中，利用一对或多对引物同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，比普通单重PCR更为高效、经济和简便。郑轩等在一个PCR体系中成功对5种病毒复合侵染的烟草材料进行多重扩增，建立了能同时检测烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草...
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