罗哌卡因对脑缺血/再灌注损伤大鼠的脑保护作用及cGAS/STING通路的影响
刘 凯, 袁 帅, 孙 峰
缺血性脑血管病是指脑部血管壁病变、血流动力学障碍等引起的脑部血液供应障碍,常会引发脑组织缺血、缺氧、脑组织坏死等短暂或持久的脑损害,进而导致机体神经功能缺损[1]。随着溶栓治疗的不断发展,血流恢复后的再灌注脑损伤逐渐成为当今研究的热点[2]。脑缺血再灌注后会释放大量炎症信号,引起炎症因子大量释放及炎症细胞聚集,进而加剧脑组织受损,严重威胁患者的生命健康[3]。罗哌卡因是临床常用的局部麻醉药,具有一定的抗炎作用,可抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应[4],Wang[5]等研究发现罗哌卡因对脑缺血时血管内皮细胞、血脑屏障具有明显的保护作用,但关于其对脑缺血再灌注的影响报道较少。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cyclic adenosine-adenosine synthase,cGAS)是核苷酸转移酶家族成员,主要通过激活膜蛋白干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)通路发挥作用,cGAS/STING通路激活可增加炎症细胞因子的表达[6],而抑制cGAS/STING通路可减轻缺血缺氧脑病导致的脑组织受损[7],因此本研究在前人研究的基础上探究罗哌卡因对脑缺血再灌注的保护作用及对cGAS/STING通路的影响,为临床缓解脑损伤提供新思路。
1.1 动物 成年SD雄性大鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司,生产许可证号：SCXK(京) 2016-0011,SPF级,约12周龄,体重约420 g。所有大鼠按照标准条件于本院动物房中饲养,自由进食、饮水,12 h昼夜交替,相对湿度约42%,温度约25 ℃,按时清洁动物房及鼠笼。本研究经动物伦理委员会批准同意。实验过程中按照动物使用的'3R“原则给予人道主义关怀。
1.2 主要试剂及仪器 罗哌卡因、尼莫地平(货号：T0386L、T0343)购于上海陶素生化科技有限公司;HE染色试剂盒(货号：G1120)购于北京索莱宝科技有限公司;大鼠肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL-1β)、IL-6、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)(货号：ml002859、ml037361、102828、059387、077384)购于上海酶联生物科技有限公司;兔源cGAS、STING、β-actin一抗、羊抗兔IgG二抗(货号：ab252416、ab227704、ab8227、ab150077)购于Abcam;细胞分级试剂盒(货号：AAT-60005,上海齐源生物科技有限公司);线粒体DNA分离试剂盒(货号：KA0895,艾美捷科技有限公司);酶标仪(美国Perkin Elmer公司,型号XElx800);凝胶成像仪(Miulab公司,型...
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