四价抗马铃薯病毒植物表达载体构建及其对烟草的转化
摘要： 该研究为了培育兼抗4种病毒的马铃薯品种，采用RTPCR技术对PVX、PVS、PVY和PLRV的外壳蛋白（CP）基因进行克隆与分析，获得了大小分别为670、800、700、600 bp的CP基因序列，将获得的CP基因序列与NCBI中已报道的序列进行比对分析，其同源性都在96%以上。根据所克隆的CP基因对靶标片段进行筛选，获得了大小约300 bp的靶标片段PVXrh、PVSrh、PVYrh和PLRVrh，同时利用 OverlapPCR技术将4种病毒的靶标片段进行拼接，得到了长度约为1 200 bp的融合片段XSYVrh，与预期目标片段XSYVyxz的相似性达100%。利用DNA重组技术将融合片段XSYVrh克隆到pGMT载体上构建成克隆载体pGMTXSYVrh，用SpeⅠ和SacⅠ对克隆载体pGMTXSYVrh和植物表达载体pART27进行同步双酶切，用T4 DNA连接酶将XSYVrh片段连接到载体pART27上，成功构建了同时含4种病毒CP基因片段的植物表达载体pART27XSYVrh。采用直接转化法将植物表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中，并利用农杆菌介导法对烟草品种T12试管苗进行遗传转化，转化后的烟草植株经PCR检测，有40株转化植株可扩增出目的条带，表明XSYVrh融合基因已成功转入烟草基因组中。
关键词： 马铃薯病毒， 融合基因， 载体构建， 遗传转化， 转基因烟草
中图分类号： S532
文献标识码： A
文章编号： 10003142（2017）01008709
Abstract： In order to simultaneously foster antifourvirus potato varieties（PVX， PVS， PVY and PLRV）， four different viral coat protein （CP） gene PVXCP （670 bp）， PVSCP（800 bp）， PVYCP（700 bp） and PLRVCP（600 bp） were obtained via RTPCR and sequenced to confirm respectively. And the comparison of the sequences that we obtained and the already reported sequences from NCBI database showed that all four viral CP genessequences were more than 90% homologous； then around 300 bp size conservative gene fragments PVXrh， PVSrh， PVYrh， PLRVrh were selected from their respective viral CP genesand four specific bands which were consistent with the fragment size were obtained via PCR amplification. The fusion sequence XSYVrh which is around 1 200 bp long w...
|
== 试读已结束，如需继续阅读敬请充值会员 ==
|
|
本站文章均为原创投稿，仅供下载参考，付费用户可查看完整且有格式内容！
(费用标准：38元/2月，98元/2年，微信支付秒开通！) |
| 升级为会员即可查阅全文 。如需要查阅全文，请 免费注册 或 登录会员 |
|
